蝙蝠葛碱介导ROS生成进而抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导膀胱癌细胞自噬性凋亡

来源 :川北医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yf15950800613
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目的:为了验证蝙蝠葛碱(Dauricine,Dau)是否能够介导ROS生成从而抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导膀胱癌细胞自噬性凋亡。方法:MTT法检测在不同浓度蝙蝠葛碱作用24h后三种细胞增殖影响;克隆形成实验检测蝙蝠葛碱对膀胱癌细胞抑制效果;蛋白免疫印迹检测不同浓度蝙蝠葛碱处理后两种膀胱癌细胞相关凋亡与自噬蛋白分子表达情况;免疫荧光检测不同浓度蝙蝠葛碱处理后膀胱癌细胞LC3活化情况;siRNA转染沉默自噬相关基因后,克隆形成实验检测蝙蝠葛碱对膀胱癌细胞抑制作用;蛋白免疫印迹分析验证蝙蝠葛碱是否通过ROS介导 PI3K/Akt/mTOR 通路。结果:MTT法检测三种细胞系存活率均降低,并呈剂量依赖性;克隆形成实验检测蝙蝠葛碱对两种膀胱癌细胞抑制作用增加;蛋白免疫印迹实验证实两种膀胱癌细胞中Bax、Cleaved-caspase 3、Cleaved-caspase 9、LC3、ATG5、Beclin1及SQSTM1的表达均增加;免疫荧光检测证实蝙蝠葛碱处理膀胱癌细胞诱导GFP-LC3广泛定位;敲低Atg5或Beclin 1克隆形成实验证实蝙蝠葛碱显着抑制膀胱癌细胞;PI3K激活显著减少蝙蝠葛碱处理的膀胱癌细胞中LC3-Ⅱ的转化;蝙蝠葛碱处理后,活性氧ROS水平显着升高;蛋白质印迹分析表明,与蝙蝠葛碱相比,蝙蝠葛碱与ROS清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)共处理膀胱癌细胞后,LC3活化、PI3K信号通路的都被抑制。结论:蝙蝠葛碱能够诱导膀胱癌细胞自噬性凋亡来抑制细胞增长,进一步发现其可能是通过介导ROS生成进而抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导膀胱癌细胞自噬性凋亡。
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