连作障碍是药用植物栽培过程中的常见问题,地黄生产中也存在十分严重的连作障碍问题,前期试验发现栽培品种和野生品种地黄连作下都表现出典型的障碍效应,如植株生长发育不良,块根无法正常膨大,病虫害严重等。本研究将野生地黄人工移栽大田连续种植,获得野生地黄头茬土壤、野生地黄重茬土壤、野生状态地黄土壤以及对照土壤四个样品,采用末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)分析技术对连作下野生地黄根际土壤微生物区系变化进行分析,结果表明:不同连作年限的野生地黄根际土壤细菌群落结构存在显著差异,通过门纲分类分析发现,野生状态地黄和头茬地黄土壤中变形菌门和厚壁菌门细菌占据优势地位。进一步种属分析发现,野生状态地黄和头茬地黄根际含有大量Bacillus,Pseudomonas等有益生防菌,而重茬地黄根际土壤滋生大量病原菌,如Clostridium,Flexibacterpolymorphus,Clostridium ghoni 等,并且不利于纤维素降解菌等有益菌群的定植。基于此,本研究开展了有益生防菌的筛选及验证试验,共筛选出2株有效拮抗菌,分别是蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)和假单胞菌TL(Pseudomonas TL)。平板对峙试验证实所筛选的2株菌均对地黄病原菌—尖孢镰刀菌有明显的拮抗效应。最后,通过地黄组培移栽苗对尖孢镰刀菌的致病性及拮抗菌的生防效果进行评价,结果显示:仅添加尖孢镰刀菌的对照组中,地黄移栽苗很快出现病变症状,枯萎死亡;添加有拮抗菌—蜡样芽孢杆菌的试验组Ⅰ中,地黄移栽苗出现病变的时间有所推迟,但是最终还是枯萎死亡,未能有效防治病菌侵害:而添加有拮抗菌—假单胞菌TL的试验组Ⅱ中,地黄移栽苗生长正常,整个试验期间未发现任何病变症状,生长正常。进一步,通过qRT-PCR技术对拮抗菌作用下土壤尖孢镰刀菌(FON)的数量变化进行检测,发现试验组Ⅱ(即添加假单胞菌TL)中,尖孢镰刀菌数量最低,其次为试验组Ⅰ(即添加蜡样芽孢杆菌),而对照组(不添加拮抗菌)中最高。同样,通过qRT-PCR技术对三组试验下两株拮抗菌的数量进行检测,发现在两组试验组中拮抗菌的数量都比对照组高。这与田间试验的qRT-PCR定量结果类似,即野生地黄重茬土壤中尖孢镰刀菌含量最高,头茬土壤次之,野生状态地黄土壤最少;而野生地黄重茬土壤中的有益菌数量明显低于野生地黄头茬土壤和野生状态地黄土壤。综上可见,野生地黄连续种植下,其根际土壤中病原菌大量滋生,而有益菌生长受抑制,这导致连作地黄的土传病害严重,连作植株表现障碍效应。但是,外源添加拮抗菌可不同程度防控病原菌尖孢镰刀菌对地黄的侵害,表现出一定的生防效果。