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前言 感染性休克(septic shock)是指严重脓毒症病人在给予足量液体复苏仍无法纠正的持续性低血压，常伴有低灌流状态及器官功能障碍，是病毒、真菌和细菌脱落的蛋白碎片或免疫原作用于机体诱发多种细胞因子如TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8、血小板活化因子(PAF)等以及炎症介质如前列环素、缓激肽、白三烯等释放所导致的全身性过度炎症反应产生破坏作用的结果。革兰氏阴性菌胞壁成分内毒素是引起感染性休克的最常见原因之一。 目前感染性休克的治疗远未达到满意的疗效，死亡率仍在50％左右。现在的防治原则是早期清除原发病灶；使用有效的抗生素控制感染；积极的多系统器官的综合支持疗法。除此之外，各种抗炎症介质、细胞因子的抗体，如LPS、TNF-α、IL-1的抗体以及NOS抑制剂等，在动物实验中似乎都有一定的作用。然而，临床试验不能证明任何一项临床有效。其中三项包括非选择性NOS抑制剂、TNF及抗内毒素单克隆抗体治疗严重感染性休克试验均因受试者病死率增加而中途停止。这些方法主要是从外源性角度来进行治疗，但总的效果并不令人满意。因此在目前感染性休克治疗无突破的情况下，能否利用刺激或激发机体细胞在漫长的进化过程中获得的内源性抗损伤能力来减轻致病因素对机体的损伤程度，在一些可预防性脓毒症高危病人开展有效预防措施，是降低脓毒症及感染性休克病人死亡率的另一思路。研究证明热休克反应可提高鼠对随后感染性休克的耐受力，但热休克反应实施起来有一定困难，而药物预处理具有方便、易行的特点。LPS耐受现象的存在，尤其是其减毒衍生物预处理为这种设想提供了可能。 迄今为止，虽然对内毒素耐受作了大量的实验研究，但大都着重于以离体的单核-巨噬系统细胞和内皮细胞为观察对象，缺乏在动物整体的、器官实质细胞的系统研究。因此，我们设计了以下的系列研究，从整体、器官、组织以及好水平剧内毒素预处理对内毒素血症的作用及其机制，为进一步研究内毒素耐受、内毒素减毒衍生物预处理的作用及应用提供实验基础。 实验材料 1．实验动物：昆明种小鼠120只，20－229，雌雄不拘；雄性Wistar大鼠102 ／q，200－2809，由中国医科大学实验动物中心提供。 2．主要实验试剂与药品：内毒素（Escherichia colt LPS Oill：B4，美国Sima公司八戊巴比妥（消化学试剂采购供应站八 TNF叱 ELISA试剂盒（购自深圳晶美生物工程公司，进口分装八个羟基香豆素（美国 Siaa公司hTUNEL检测试剂盒（购自武汉博士德公司）中主要包括：末端脱氧核糖核酸转移酶（Termina de…ucleoti邮Trans咖se，TdT，美国Promega 公司太地高辛标记的规Th（DIG－dUTP，德国 B．M．公司人生物素标记抗地高辛抗体（Anh刀IGEiotin，美国 SIGMA公司）和 SABC（博士德公司人 Bcl－20SP＊明心一抗及SP免疫组化试剂盒（购自北京中山公司人 TNF呕、ICAM＊、iNOS一抗及免疫组化试剂盒（购自武汉博土德公司人 Tizol Rea－gellt（Promega公司人逆转录试剂盒、酶及RT－PCR所需的其他试剂（Takara公司厂其它均为国产分析纯试剂。 3．主要实验器材：RM6000多导生理检测仪（日本光电厂 Dupont ST－ZI型低温离心机（美国h Eh 800型酶标仪（美国 BIO－TEK＊日立 F2000荧光分光光度计（日本人 A200 DS型电子天平（美国人 JUNGC 型切片机；Ol卿us显微镜（日本）； Obmpus AX 70显微摄像系统（日本）； MetaMo。pVO…Us DPIWBXS二显微图像分析系统（日本人Mebm。ph1呷system（美国UIC公司人LKB力型超薄切片机；透射电镜门ppON EM10C，美国＊IIEIDOLPH DIAX 900型匀浆机（德国hPTC－100PCR扩增仪（美国人DYY－Ill31A型电泳仪问京＊ KODAKID型凝胶成像分析系统（美国h GIS－700D数码凝胶扫描分析系统（上海＊日立7170 AU全自动生化分析仪；5500P紫外光、可见光连续分光光谱仪（法国人 L X J—11型离心沉淀机（上海医疗器械工厂h SHH WZI Cr 600型电热恒温水浴箱问京长安科学仪器厂＊KS—150超声波细胞粉碎机（宁波科生仪器厂厂722光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂厂 B碉rown微量泵（德国人 Hitachi 8080型原子吸 ·2·收分光光度计（美国人 Cell羽yn 1700型全自动血常规分析仪（美国厂 ACL200型全自动血凝分析仪（美国＊WZZA型微量震荡器问京人 实验方法 一、动物模型制备、分组及取材 雄性Wistar大鼠102只，随机分为三组：生理盐水组门组，n＝18八LPS对照组几组，n＝42＊ LPS预处理组u组，n＝42入J组：首次，经腹腔注射 Lp 0·25mg／kg；24hr后再经腹腔注射 LPS 0．s略kg，其余两组在上述时间均给予等量NS，预处理期间大鼠可自由进食水；第二次腹腔注射72hr后，3％戊巴比妥钠门0mg／kg）腹腔注射麻醉，股静脉插管用于输液和给药，股动脉插管持续监测动脉压，部分大鼠＊＝6）经右颈动脉插管至左心室人组和 P组经股静脉插管一次注人脱 10mg／kgJ组给予等量