目的:便秘是临床常见的多种病因导致的复杂症状,缠绵难愈。长期便秘不仅影响患者的消化与吸收,也常致肠道菌群结构紊乱、诱发或加重肠炎、心脑血管疾病等,甚至与癌症的发生有关。中医在辨证论治等理论指导下,针对便秘发生的原因对症用药,如对于体虚便秘,常施以火麻仁等“润肠通便”药(或复方),往往疗效满意。笔者所在课题组认为“润肠通便”可解释为火麻仁有“滋养”与“泻下”双重功效。前期研究表明,火麻仁对便秘或衰老模型动物能够缓解便秘、改善血液循环、调节免疫、减轻自由基损伤等;能延长家蚕生存期,有一定抗衰老作用;对多种肠道菌的体外生长或体内定植有调整作用。然而,对于火麻仁“润肠通便”的确切机制有待进一步阐明。近年来研究表明肠道菌群对健康至关重要,并将调整菌群作为防治疾病与衰老的重要途径,进一步研究表明肠道菌群可通过干预TLRs通路的表达而影响健康。因此,本实验从肠道菌群调节及对TLRs信号通路影响的角度,探讨火麻仁润肠通便的作用机制,为火麻仁合理应用及开发提供基础资料,为中药基础研究提供新的思路与借鉴。方法:1.建立Wistar大鼠便秘模型。选取20只SPF级Wistar大鼠,使用复方地芬诺酯(10mg/kg)进行灌胃,连续给药20d。实验结束后,检测大鼠整体指标(体重变化、肠道内容物所占比例、肠道张力变化);肠道菌群指标(革兰氏染色检测盲肠中革兰氏阳性菌/革兰氏阴性菌(G+/G-)、杆菌/球菌比值;PCR-DGGE检测盲肠中菌群结构变化;24h粪便量、传统细菌培养方法检测粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌变化);采用苏木精-伊红染色(HE染色)检测结肠病理变化。2.火麻油对模型大鼠肠道菌群与TLRs信号通路的影响。48只SPF级Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为空白组、模型组(10mg/kg)、火麻油组(21.6g/kg)、阳性对照组(2.7g/kg),除空白组给予蒸馏水外,其他各组分别采用复方地芬诺酯进行灌胃,造便秘模型;2h后,给予药物治疗。检测大鼠整体指标(体重、肠道内容物所占比例、24h排便);采用ELISA法测定血清中TLRs信号通路相关因子 TLR4、Myd88、NF-kB、KLotho 蛋白、IL-6、IFN-a、TNF-a 变化；检测肠道菌群指标(粪便中细菌变化;盲肠中G+/G-、杆菌/球菌比值,采用PCR-DGGE检测菌群结构的变化;采用气相色谱法测定盲肠中SCFAs的变化);对结肠进行HE染色。3.火麻仁水提液对模型大鼠肠道菌群与TLRs信号通路的影响。48只SPF级Wistar大鼠,雌雄各半,随机分为空白组、模型组(10mg/kg)、火麻仁水提液(21.6g/kg)、阳性对照组(2.7g/kg),除空白组给予蒸馏水外,其他各组分别采用复方地芬诺酯进行灌胃,造便秘模型;2h后,给予药物治疗。检测整体指标、血清TLRs信号通路相关因子、肠道菌群变化、结肠HE染色。(同方法2)结果:1.成功建立复方地芬诺酯致肠道菌群紊乱的模型大鼠模型。与空白组大鼠相比,模型组回肠收缩频率降低(P<0.05);肠道内容物堆积(P>0.05);24h的排便量减少(P<0.01);新鲜粪便中大肠杆菌及双歧杆菌数量增多(P>0.05,P<0.05),乳酸杆菌数量减少(P<0.01);盲肠内细菌总数增多、G﹢/G-比值、杆菌/球菌比值降低(P<0.05,P<0.05);PCR-DGGE结果显示,盲肠大鼠盲肠内细菌总量减少,某些菌属增多,部分细菌种属丢失;病理切片显示盲肠大鼠的结肠结构严重损坏(P<0.01)。2.火麻仁油能够降低模型大鼠肠道内容物堆积(P>0.05),降低TLR4水平、Myd88、IL-6、TNF-a 水平(P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05),升高 NF-KkB、Klotho蛋白、IFN-a(P>0.05,P>0.05,P>0.05);促进排便,增加粪便含水量(P>0.05,P>0.05);调整盲肠中G+/G-、杆菌/球菌的比值(P<0.01,P<0.05);降低厚壁菌门/拟杆菌门比值;增高盲肠内乙酸、丙酸、丁酸(P<0.01,P>0.05,P<0.01);改善肠道结构损伤(P>0.05)。3.火麻仁水提液能够降低模型大鼠肠道内容物堆积(P>0.05),降低TLR4、Myd88、TNF-a 含量(P>0.05,P>0.05,P>0.05),升高 NF-kB、Klotho 蛋白、IL-6、IFN-a(P>0.05,P>0.05,P>0.05,P>0.05);促进排便,降低粪便粒重,增加粪便含水量(P<0.05,P>0.05,P<0.05);降低粪便中大肠杆菌、双歧杆菌的量,增加乳酸杆菌的量(P>0.05,P<0.05,P<0.05);升高模型大鼠细菌总数(P<0.01);降低盲肠内乙酸、丙酸、丁酸(P<0.01,P>0.05,P>0.05);改善结肠病理变化(P<0.01)。结论:1.便秘模型动物出现肠道菌群紊乱,而肠道菌群紊又能够加重和促进模型动物便秘的发生与发展。该造模方法可以用于肠道菌群调节相关研究。2.火麻仁油及水提液能够缓解便秘状态、促进紊乱的肠道菌群恢复平衡、减轻模型动物的结肠炎性损伤、调节TLRs信号通路的表达。3.火麻仁油及水提液对便秘模型动物的影响有一定差别,作用特点各异。4.结合前期火麻仁改善衰老及便秘模型动物血脂水平、提高免疫、减轻氧化损伤等研究结果,推测火麻仁润下通便、补中益气作用的发挥是通过改善肠道菌群结构及调节TLRs通路实现的。