禽霍乱(Pasteurellosis)是由多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)所引起的禽类接触性传染病,其特征性主要表现为败血症、炎性出血下痢以及高死亡率。由于抗生素的滥用及大剂量使用,导致多杀性巴氏杆菌的耐药性越来越强,临床上防治效果不佳。为了探究多杀性巴氏杆菌质粒与耐药的相关性,本研究分别对2株禽源多杀性巴氏杆菌(编号为FC6605和FC6607)通过细菌纯化培养、荚膜群鉴定、药物敏感性试验,提取质粒和电泳观察,将质粒条带切下、胶回收,运用超声波将回收的质粒进行破碎,与pUC118 Hinc II/BAP连接,转化感受态细胞,蓝白斑筛选培养,挑取白斑菌落扩大培养后测序,用软件Seqman将得到的序列拼接,得到质粒FC6605-3和FC6607-3的全序列,然后设计两对引物,扩增质粒,验证序列的正确性,再运用DNAMAN、DNASTAR等软件并在NCBI官网上进行序列比对和分析。结果发现,菌株FC6605与FC6607均为荚膜A型,菌株FC6605携带有5个不同大小的质粒,FC6607携带有7个不同大小的质粒。通过24种药片的药物敏感性试验发现,菌株FC6605只对氟苯尼考一种药物敏感,菌株FC6607仅对阿莫西林、氟苯尼考、强力霉素三种药物敏感,两株菌均为多重耐药的多杀性巴氏杆菌。质粒FC6605-3序列全长3086bp,运用软件推测有23个开放阅读框(ORF),质粒FC6607-2序列全长3086bp,推测有25个开放阅读框(ORF)。经质粒同源性比对发现,与质粒FC6605-3核苷酸序列有同源性的基因序列或基因组有80个,其中同源性较高的有10个(95%～100%),序列平均G+C含量为43.51%,在整个序列分布比较均匀;与质粒FC6607-2核苷酸序列有同源性的基因序列或基因组也有80个,其中同源性较高的有9个(96%～100%),序列平均G+C含量为43.55%,在整个序列分布也比较均匀。经过NCBI官网BLAST 比对氨基酸同源性,发现在质粒FC6605-3的23个不同大小的开放阅读框所编码的氨基酸中,其中的7个ORF与来自不同菌的甲氧苄啶抗性二氢叶酸还原酶DfrA有着极高的相似度(100%),2个ORF与氨基糖苷腺苷转移酶相似度为100%,2个ORF编码的氨基酸与动力蛋白相似度为100%,1个ORF编码的氨基酸与转座酶相似度为50%,1个ORF编码的氨基酸与转录调节子相似度为68%,1个ORF编码的氨基酸与截短的二氢蝶呤合成酶相似度为100%,5个ORF编码的氨基酸与与来自不同细菌的假定蛋白有着不同程度的相似度(59%～95%),还有4个ORF编码的氨基酸并没有找到与任何细菌有相似度的氨基酸。在质粒FC6607-2的25个开放阅读框所编码的氨基酸中,其中的7个ORF与来自不同菌的甲氧苄啶抗性二氢叶酸还原酶DfrA有着极高的相似度(80%～100%),2个ORF与氨基糖苷腺苷转移酶的相似度为100%,3个ORF编码的氨基酸与动力蛋白相似度为96%～100%,1个ORF编码的氨基酸与转录调节子的相似度为68%,1个ORF编码的氨基酸与截短的二氢蝶呤合成酶的相似度为100%,5个ORF编码的氨基酸与来自不同细菌的假定蛋白有着不同程度的相似度为59%～95%,而5个ORF编码的氨基酸并没有找到与任何细菌有相似度的氨基酸。通过ORF推测的氨基酸比对,发现质粒FC6605-3和FC6607-3上存在两种耐药基因,分别为甲氧苄啶抗性二氢叶酸还原酶DfrA和氨基糖苷类腺苷转移酶;经进一步的药敏试验结果表明FC6605和FC6607两菌株对相关抗生素产生了不同程度的耐药性,揭示了禽源多杀性巴氏杆菌的质粒上存在耐药基因。