前言 p27kip1是CDI类蛋白家族主要成员,它能结合cyclin-cdk复合物进行调节细胞周期的进程。近年来发现雌激素调节细胞的增殖和分化与细胞周期有关。本试验是研究细胞周期蛋白p27kip1在雌激素抑制血管平滑肌细胞的表达规律,从血管平滑肌细胞的增生周期着手阻断细胞周期的进行,可能为血管增殖性疾病的防治提供有效方法。 方法 1.动物模型建立 250克左右,3个月龄雌性Wistar大鼠84只,去势(去除卵巢)后随机分为,单纯静脉移植组,去势后静脉移植组,去势后静脉移植给予17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)治疗组。共3组,每组7只,E2剂量为每天20μg/kg,皮下注射,取1厘米长自体颈经脉移植到同侧颈总动脉上,分别于术后3,7,14,28天切取移植静脉,进行下列检测。(去势后十天再行静脉移植) 2.指标检测 (1)组织学观察:HE染色,Verhoef弹力纤维染色,采用计算机图像分析仪测量内膜,了解内膜增生情况。 (2)p27kip1与PCNA的免疫组化染色:观察血管平滑肌细胞内p27kip1产物的动态变化及血管平滑肌细胞增殖情况,分析p27kip1表达对血管平滑肌细胞增殖的影响。 (3)Western blot检测p27kip1在各时期移植静脉局部的表达。 3.免疫组化观察方法及统计学分析 计数阳性细胞所得数据用阳性率(%)表示,实验数据((?)±s)分析采用