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目的：探讨建立一种特异性和敏感性较高的检测肺癌循环血中肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)的方法，以利于发现早期肺癌隐性微转移、评估肺癌的预后、监测术后肺癌肿瘤复发与转移、选择治疗方案以及判断疗效。 方法：选择对象为经手术切除病理确诊为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的35例初治患者，其中，Ⅰ期15例、Ⅱ期9例、Ⅲ期9例、Ⅳ期2例；病理分型为肺鳞癌22例、肺腺癌13例。作为对照组选择肺部良性病变患者20例，健康志愿者20例。首先应用抗细胞角质蛋白7／8(cytokeratin7／8，CK7／8)的单克隆抗体包备的纳米磁珠，分别对早期NSCLC患者(1期)、中晚期NSCLC患者(11期～Ⅳ期)、肺部良性病变患者及健康志愿者的外周血标本进行免疫磁性分离(immunomagnetic separation，IMS)，然后应用免疫细胞化学染色法(immunocytochemistry，ICC)，使用抗pan-CK抗体(AEl／AE3) 对经IMS浓缩出的肿瘤细胞或异常上皮细胞进行免疫染色，以检测早期NSCLC患者循环血中的肿瘤细胞。同时对联合应用IMS和ICC检测CK阳性细胞的方法与单纯ICC方法、以及与应用巢式逆转录-聚合酶链反应(巢式RT-PCR)技术检 解放军军医进修学院 硕士学位论文．中文摘要． 测CK19mRNA、CEAmRNA的方法进行了比较，探讨了应用IMS能 否提高早期肺癌患者CTCS的检出率。此外，我们随访了术前 和术后早期O期）NSCLC患者，评价了肺癌患者CTCS的阳性检 出与临床预后的关系。 结果：1．早期肺癌（1 期）外周血标本中，应用1m 处理 并经 ICC检测后的 CK阳性细胞检出率为 33．3％（5／15）；单 纯ICC的CK阳性细胞检出率为0％（0／15）；应用巢式RT－PCR 检测 CK19mRNA阳性率为 46．7％（7／15）、CEAmRNA阳性率为 40．0％（6／15）。2．中晚期肺癌（11～IV期）标本中，联合应用 IMS及 ICC检测的 CK阳性细胞检出率为 50％（10／20）；单纯 ICC的 CK阳性细胞检出率为 0％（0／20）；而巢式 RT－PCR检测 CK19mRNA 阳性率为 65％（13／20）、CEAmRNA 阳性率为 60％ （12／20）。3．肺良性病变标本中，联合应用IMS及ICC检测的 CK阳性细胞检出率为0％（O／20）；单纯ICC的CK阳性细胞检 出率为0％（0／20）；巢式RT－PCR检测CK19mRNA阳性率为40 ％（8／ZO）、CEA。RNA阳性率为30％（6／20）。4．健康志愿者标 本中，联合应用 IMS及 ICC检测的 CK阳性细胞检出率为 0％（0 ／20）：单纯 uC的 肌阳性细胞检出率为 0％（0／20）；巢式 RT－PCR检测 CK19mRNA阳性率为 30％（6／20）、CEAmRNA阳性 率为25％u／20厂 5．随访了 15例早期（I期）肺癌病人，其中 5例术前联合应用IMS及ICC检测CK细胞阳性的患者，术后1 个月再次行CK细胞检测，2例仍为阳性，其余3例为阴性；在 随后进行的 6～9个月随访中，术前 CK细胞检测为阴性的 10 例1期肺癌病人及3例术前CK细胞阳性但术后检测为阴性的患 者一般情况良好，而2例术前及术后检测CK细胞均为阳性的患 一2 一 解放军军医进修学院 硕士学位论文．中文摘要． 者都发生了肿瘤的复发和转移。 结论：纳米免疫磁性分离技术是一种捕获肺癌CTCS的灵 敏方法。早期肺癌CTCS检测阳性提示可能伴有隐性微转移的存 在。肺癌患者CTCS的阳性检出与临床预后有一定的关系。本实 验结果提示应用纳米免疫磁性分离技术检测肺癌CTCS 的方法 对早期肺癌隐性微转移的发现、肺癌预后的评估、肺癌术后肿 瘤复发与转移的监测、治疗策略的选择、快速评估治疗效果及 重新确定肺癌分期具有重要意义。但其临床价值仍需要进一步 多中心、随机、大样本病例的临床研究和长期随访加以证实。