研究背景宫颈癌作为女性发病率第二位的生殖系统恶性肿瘤,严重威胁着女性健康。放射治疗在宫颈癌治疗中具有很重要的地位,然而并非所有的宫颈癌病例都对放疗敏感。个体差异及肿瘤异质性的存在使得不同病例产生对放射治疗的不同敏感性。放疗耐受的存在成为限制放射治疗的疗效和治疗失败的重要原因。因此研究放疗耐受发生的原因,以及研究其发生过程中的分子机制具有很重要的意义,可以为克服放疗耐受提供潜在的分子靶点。自噬作为生物进化过程中相对保守的一个代谢过程,广泛存在于植物和其他低等生物的生命过程中。自噬在肿瘤治疗中所起的作用一直存在争议,人们形象的称之为“双刃剑”,近年放疗领域的研究倾向于将自噬认为是放疗的“增敏剂”。CIP2A是近年来新发现的一种人类致癌蛋白,它主要是通过抑制PP2A对c-Myc 62位丝氨酸(S62)的去磷酸化,从而抑制了c-Myc蛋白的降解,增加了胞内c-Myc的蛋白水平来发挥作用的。研究发现,CIP2A在很多肿瘤都呈现过表达,并且与它们的恶性程度不良预后密切相关。我们课题组最近的研究发现CIP2A通过调节多药耐药蛋白(MDR)的产生,导致了宫颈癌细胞多药耐药的产生。研究目的1.明确CIP2A在宫颈癌中与放疗耐受的关系。2.明确CIP2A在宫颈癌中与自噬之间的关系。3.验证CIP2A在宫颈癌中调节放疗耐受的机制。研究方法与结果1.CIP2A与宫颈癌放疗敏感性的研究：对照组与干扰CIP2A组分别给予宫颈癌HeLla、SiHa细胞照射不同剂量的的X射线,然后通过细胞计数实验,CCK8实验,细胞生存率实验检测射线对HeLa、SiHa细胞的杀伤作用。实验结果显示：在特异性敲低CIP2A后,射线对HeLa、SiHa细胞增殖的抑制能力显著增加,敲低CIP2A组细胞数量减少(p<0.01,p<0.05),增殖速度降低,克隆形成数也明显减少(p<0.05)。这表明,在HeLa、SiHa细胞中CIP2A与放疗敏感性有关,敲低CIP2A能够提高HeLa细胞对射线的敏感性。2.放射条件下,宫颈癌细胞中CIP2A与DNA损伤的关系的研究：利用Western Blotting实验检测敲低HeLa、SiHa细胞中的CIP2A后,剪切的PARP1的蛋白表达水平,然后通过DAPI实验和彗星电泳实验检测凋亡小体的数量和细胞核的形态。结果显示：敲低CIP2A后剪切的PARP1蛋白水平表达升高,DAPI实验显示凋亡小体增多,彗星试验中拖尾细胞增多。这表明敲低CIP2A后HeLa, SiHa细胞中的DNA损伤加重。3.宫颈癌细胞照射下,CIP2A与自噬水平的研究：利用Western Blotting实验检测不同照射剂量下HeLa、SiHa细胞中对照组与干扰CIP2A组LC3B和P62蛋白表达水平,然后通过电镜实验检测了HeLa细胞中的自噬小体数量。结果显示：干扰CIP2A组LC3B蛋白表达水平升高,P62表达水平下降。电镜实验中,干扰CIP2A组自噬小体数量增多(p<0.05)。这表明,在HeLa、SiHa细胞中,敲低CIP2A能上调细胞内的自噬水平。4.验证CIP2A是否通过抑制自噬降低了宫颈癌细胞的放疗敏感性：在HeLa、 SiHa细胞里敲低CIP2A的基础上,敲低自噬关键基因Beclinl的表达,通过克隆形成实验验证干扰组与对照组的细胞生存率。结果显示：干扰Beclinl组的克隆形成数增多,细胞生存率增加(p<0.01)。这表明：CIP2A可能通过抑制自噬降低了宫颈癌细胞的放疗敏感性。结论：本研究首次证实了CIP2A参与调节宫颈癌的放疗敏感性,这种作用主要是CIP2A通过抑制自噬来实现的。当我们加入自噬的干扰剂抑制自噬后,敲低CIP2A带来的放疗增敏也有了部分的回转。因此,我们的研究结果提示,CIP2A作为一个新的基因治疗靶标,在宫颈癌的综合治疗中有着潜在的应用前景。