【摘 要】
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以苄基丙二酸(BA)及对羟基苯丙酸(34-HPA)分别作为苄基丙二酸和4-甲基苯酚的半抗原,采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联作为人工免疫原免疫3~4个月大的新西兰大白兔,制备多
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以苄基丙二酸(BA)及对羟基苯丙酸(34-HPA)分别作为苄基丙二酸和4-甲基苯酚的半抗原,采用活化酯法与牛血清白蛋白(BSA)偶联作为人工免疫原免疫3~4个月大的新西兰大白兔,制备多克隆抗体,饱和硫酸铵盐析纯化后其效价可分别达到1:102400,1:204800。以混合酸酐法合成半抗原-卵清蛋白(OVA)偶联物作为包被原,苄基丙二酸和4-甲基苯酚为竞争的抗原,建立间接竞争ELISA检测方法。苄基丙二酸的各工作条件为:包被浓度3.46μg/mL,抗体稀释倍数1:6400,酶标二抗稀释倍数1:2000,0.1%明胶封闭1.0 h,竞争时间1.0 h,酶标二抗反应时间1.5 h;在1.0×10-2 ng/mL~1.0×103 ng/mL的范围内呈线性相关,得标准曲线方程y = -13.59x + 63.58,最低检测限0.01 ng/mL,板内差异为5.5%,板间差异在3.8%~7.8%的范围内。检测尿液中BA浓度,回收率87.79%~111.35%,回收效果良好。4-甲基苯酚的各工作条件为:包被浓度1.05μg/mL,抗体稀释倍数1:12800,酶标二抗稀释倍数1:1000,0.1%明胶封闭1.5 h,竞争时间与酶标二抗反应时间均为1.0 h,在1.0×10-2 ng/mL~1.0×104 ng/mL的范围内呈线性相关,得标准曲线方程y = -9.524x + 64.48,最低检测限0.002 ng/mL,板内差异为6.3%,板间差异在4.3%~6.7%范围内。检测尿液中4-MP,回收率87.52%~110.50%。
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