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目的:骨质疏松症是影响老年人健康的常见疾病,随着人口老龄化进程的加快,骨质疏松症的患病率势必将逐年增高,如何有效地防治骨质疏松症成为目前研究的热点问题。骨质疏松的发生与骨形成和骨吸收之间平衡的紊乱密切相关,目前临床用于治疗骨质疏松症的药物多集中于抑制骨吸收方面,促进骨形成的药物相对较少。大多数抑制骨吸收药物在使用后能够减少骨质流失,但是不能恢复已经丢失的骨量和恶化的骨骼微结构,而且长期服用存在一定的副作用。因而,需要积极研发促进骨形成药物,为骨质疏松症的治疗提供更为有效的新选择。从中草药和天然植物中提取的活性物质具有经济、安全、有效、毒副作用小且可长期服用的独特优势,已成为开发新药的有效来源。熊果苷是从熊果叶和其他各种植物中提取的天然活性物质,具有美白、抗炎和抗氧化应激等多种生物活性。然而,熊果苷对成骨细胞的作用迄今为止还没有相关报道。本研究旨在研究熊果苷在体外对MC3T3-E1细胞增殖和分化的影响及相关机制。研究方法:1、本研究选择小鼠MC3T3-E1成骨前体细胞作为研究对象,利用Annexin V-FITC/PI流式细胞凋亡检测评估熊果苷对MC3T3-E1细胞凋亡的作用;2、选取适宜的浓度通过CCK-8实验和EdU标记测定实验评估熊果苷对MC3T3-E1细胞增殖的影响;3、流式细胞周期检测熊果苷对MC3T3-E1细胞周期的影响;4、碱性磷酸酶染色评价熊果苷对MC3T3-E1细胞碱性磷酸酶活性的影响;5、实时荧光定量PCR检测熊果苷对MC3T3-E1细胞COL1A1,BGLAP,SP7,RUNX2和β-catenin在基因水平表达的影响;6、Western blotting测定熊果苷对MC3T3-E1细胞Runx2和β-catenin在蛋白水平表达的影响。为进一步探讨熊果苷增强骨形成的潜在分子机制,使用Wnt信号通路抑制剂DKK-1验证熊果苷对MC3T3-E1细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:1、Annexin V-FITC/PI流式细胞凋亡检测结果显示:熊果苷浓度在100μM以下时,对MC3T3-E1细胞无明显的毒性作用;2、CCK-8实验和EdU标记测定实验结果显示:熊果苷可促进MC3T3-E1细胞的增殖;3、细胞周期流式检测显示:熊果苷可以增加MC3T3-E1细胞S期细胞的比例,同时减少G1期细胞的比例;4、碱性磷酸酶染色结果显示:熊果苷提高MC3T3-E1细胞中碱性磷酸酶活性;5、实时荧光定量PCR结果显示:熊果苷上调MC3T3-E1细胞中COL1A1、BGLAP、SP7、RUNX2和β-catenin的mRNA表达水平。6、Western Blot结果显示,熊果苷上调RUNX2和β-catenin的蛋白表达水平,DKK-1预处理可以抑制熊果苷引起RUNX2蛋白水平的升高。结论:1、熊果苷可以促进成骨细胞的增殖,但不影响成骨细胞的凋亡;2、熊果苷可以提升成骨细胞碱性磷酸酶的活性,促进成骨细胞分化过程中特异性基质蛋白和转录因子的表达;3、Wnt/β-catenin信号通路参与了熊果苷促进成骨细胞增殖和分化的过程。