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目的：探讨MICA基因多态性与乳腺癌细胞对NK杀伤敏感度的关系。方法：1. RT-PCR扩增乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435S、SK-BR-3的MICA基因，分别克隆入pMD18-T载体，DNA测序分析。2.构建MICA不同等位基因真核表达载体并转染293T细胞，western blot和流式细胞术检测转染后MICA的表达。3.分离外周血单个核细胞，用“IL-2+IL-12+IL-15+IL-18”细胞因子组合定向扩增NK细胞，再用VarioMACS系统分选纯化NK细胞。4. LDH法检测NK细胞对MICA等位基因转染293T细胞的杀伤活性，Elispot法检测MICA等位基因转染293T后诱导NK细胞分泌穿孔素(perofrin,PFN)、颗粒酶B(granzym B, Gzm B)的能力。结果：1.测序结果显示：MCF-7细胞表达MICA*008/A5.1和MICA*001/A4，MDA-MB-435S细胞表达MICA*010/A5，MDA-MB-231和SK-BR-3细胞均表达MICA*019/A5和MICA*002/A9*；蛋白序列分析比对发现：MICA019/A5和MICA*010/A5仅在蛋白N端第29位氨基酸有差异，分别为精氨酸(Arginine, Arg)和脯氨酸(proline, Pro)。结构分析发现该Arg或Pro位点在蛋白结构的一个beta折叠上，而且是处于偏中间的位置。2.将MICA等位基因MICA*008/A5.1、MICA*001/A4、MICA*019/A5、MICA*002/A9、MICA*010/A5分别克隆入pcDNA3. l/myc-His(-) A载体（重组载体分别命名为pMCFA5.1、pMCFA4、p231A5R、p231A9> p435A5P),重组载体转染293T细胞后，western blot检测目的蛋白的表达，结果显示：pMCFA5.1组表达最低，其次是p435A5P组，而pMCFA4组与p231A5R组、p231A9组表达较高；流式检测细胞膜表面目的蛋白的表达，结果显示：p435A5P组表达最低，其次是pMCFA5.1组和MICA*001/A4组，而p231A5R组和p231A9组表达较高。3.外周血单个核细胞定向扩增NK细胞—，培养17天后，NK细胞(CD3CD56+)比例可达(72.1±2.9)%，NKG2D达(93.7土3.6)%;分选后NK细胞纯度可达(95.2土3.0)%，NKG2D达(98.1土1.5)%。4. LDH检测结果显示：转染了MICA基因的293T细胞对NK细胞杀伤的敏感性明显升高（PC0.05);在MICA转染的293T中，p435A5P组对NK杀伤的敏感性最低(PC0.05);而pMCFA5.1、pMCFA4、p231A5R、p231A9各组之间相比无统计学差异（P>0.05)。Elispot检测结果显示：转染了各种MICA基因的293T细胞能明显诱导NK细胞释放穿孔素和颗粒酶B (PC0.05);在MICA转染的293T中，p435A5P组诱导NK细胞释放穿孔素和颗粒酶B的能力最低（P<0.05);而pMCFA5.1、pMCFA4、p231A5R、p231A9各组之间相比无统计学差异（P>0.05)。结论：MICA基因多态性与乳腺癌细胞对NK杀伤的敏感性有关。通过检测MICA等位基因，筛选对NK细胞治疗敏感的肿瘤患者，可实现NK细胞的个体化治疗。