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第一部分采用全自动标准化方法检测正常人血浆VWF水平及其影响因素分析目的采用全自动标准化方法检测正常人血管性血友病因子(VWF)各指标并分析其影响因素。方法采用全自动、标准化检测仪及配套试剂测定70名正常人VWF抗原(VWF∶Ag)、VWF瑞斯托霉素辅因子活性(VWF∶Rco)、VWF胶原结合试验(VWF∶CB)、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ∶C),比较年龄、ABO血型、性别及地域因素对正常人VWF各指标的影响。对英国国家生物标准与检定所(NIBSC)确认的8个标准血浆样本(2名正常人、6例2型VWD)进行VWF各项指标检测。结果(1)70名正常人血浆VWF∶Ag为(95.4±44.9)%,VWF∶Rco为(105.9±35.4)%,VWF∶CB为(89.8±28.4)%;VWF∶Rco/VWF∶Ag比值为1.18±0.25,VWF∶CB/VWF∶Ag比值为1.03±0.29。(2)年龄≥30岁组与<30岁组比较,血浆VWF各指标差异均无统计学意义(P>0.05);(3)O型血组VWF∶Rco、VWF∶CB低于非O型血组(t=2.074,P=0.042;t=3.949,P=0.001),VWF∶Ag、VWF∶Rco/VWF∶Ag、VWF∶CB/VWF∶Ag比值差异无统计学意义(P>0.05);(4)男、女性组VWF各指标差异无统计学意义(P>0.05);(5)北方(淮河以北地区)组VWF∶Ag、VWF∶CB高于南方(苏州地区)组(t=4.525,P=0.001;t=3.214,P=0.002),VWF∶Rco/VWF∶Ag、VWF∶CB/VWF∶Ag比值低于南方组(t=6.373,P=0.001;t=2.902,P=0.005),VWF∶Rco差异无统计学意义(t=1.598,P=0.115)。(6)8个标准血浆样本各项VWF指标检测结果符合已知诊断。结论通过使用全自动标准化检测设备首次获得较完整的正常人血浆VWF水平检测数据;ABO血型和地域因素对VWF水平有显著影响,而年龄和性别的影响不显著。第二部分73例血管性血友病的临床分析目的采用全自动标准化方法检测血管性血友病(VWD)患者血浆血管性血友病因子(VWF)各指标,同时回顾性分析患者的临床资料,旨在进一步提高我国对VWD患者的临床与试验诊断效率,促进VWD的规范化诊治。方法采用全自动标准化VWF抗原和活性检测方法对我院诊治的73例VWD患者的VWF抗原(VWF∶Ag)、VWF瑞斯托霉素辅因子活性(VWF∶Rco)、VWF胶原结合试验(VWF∶CB)、凝血因子FⅧ活性(FⅧ∶C)进行检测,并采用VWF多聚体分析方法进行分型诊断试验,同时回顾性分析患者的临床出血表现和治疗转归情况。结果73例VWD患者中,男性27例,女性46例,男性中位年龄8(1~40)岁,女性中位年龄25(1~65)岁。1型28例(38.4%),2型20例(27.4%,包括2A型14例、2B型2例、2M型3例、2N型1例),3型25例(34.2%)。出血表现多以皮肤瘀斑(65.8%)、鼻出血(61.6%)、牙龈出血(46.1%)、术后或外伤后出血难止(15.1%)为主,女性患者中,27例患者出现月经量增多(58.7%)。按照ISTH-BAT问卷表统计出血积分,43例患者被认为存在异常出血(57.5%)。35例患者进行了替代治疗,4例月经量多的女性患者在替代治疗的基础上联合性激素止血,1例因出血难以控制行子宫切除术。结论VWD患者的临床出血表现具有较大异质性,通过自动化检测手段可以提高VWD的临床与试验诊断效率,必要的诊断与分型诊断试验可以对其进行精确的分类,以便予以个体化的治疗。第三部分22例血管性血友病的基因检测及发病机制研究目的采用一代测序(Sanger)和二代测序(NGS)对血管性血友病(VWD)患者进行血管性血友病因子(VWF)基因筛查,比较两种测序方法在VWD基因检测中的优劣性。同时研究其基因型与表型之间的关系,以便进一步探讨VWD的分子发病机制。方法本研究收集了22例VWD患者的外周血标本以及临床和实验室检查资料,所有患者均进行了NGS检测(包含目前已知的与出凝血疾病相关的89种基因),其中11例患者同时采用Sanger法对VWF基因进行了测序。结果22例患者中,1型VWD 4例,2A型VWD 1例,2B型VWD 2例,2M型VWD 3例,3型VWD 12例。22例VWD患者中共发现25种VWF基因突变,其中8种为未见报道的新的基因突变。1型和2型VWD患者以杂合突变为主,3型患者主要表现为复合杂合突变。NGS在10例VWD患者中发现了14种VWF基因突变,检出率为91%;Sanger法在7例患者中发现5种VWF基因突变,检出率为64%。除VWF基因外,NGS在10例患者中共检测到与出凝血疾病相关的14种基因的16种突变。结论通过对22例VWD患者进行基因筛查,共发现了8种新的VWF基因突变,扩充了我国VWF基因突变数据库。VWF基因突变的检测有助于VWD的诊断与鉴别诊断,有助于更好地理解VWF分子遗传学和相关表型的关系。最后,NGS提供了一个有效的用于分析单个大基因的实验室检测手段,其便捷性、准确性较前大幅提高,对于VWD基因诊断策略的改进具有重要意义。