【背景】慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染严重威胁人类健康。目前认为,宿主免疫调控紊乱是导致HBV感染慢性化的重要原因,并与疾病进展密切相关。T细胞亚群及其细胞因子在维持机体免疫平衡中起着重要作用。T细胞亚群通常包括Th1、Th2、Th17、Treg等,其中Th17主要参与机体的促炎反应。IL-23是促进幼稚辅助性T细胞向Th17分化的关键因子,成熟后的Th17细胞通过产生IL-17、IL-21、IL-22等细胞因子发挥免疫调控作用。大量研究表明,Th17及其相关细胞因子参与了多种肝脏疾病的发生发展。本课题组长期致力于慢性肝病的综合防治。我们前期研究发现:IL-17在乙肝肝硬化失代偿期患者外周血中显著升高;患者接受自体外周血干细胞移植治疗后,随着肝功能的逐渐恢复,外周血IL-17水平也显著降低。进一步的动物实验表明:外源性IL-17能够加重CCl4诱导的肝损伤,利用单克隆抗体中和IL-17可有效减轻肝损伤;干细胞治疗可有效减轻动物肝损伤,外源性IL-17能够在一定程度上抵消干细胞的治疗效应。由此提示,IL-17在肝脏损伤及修复中起着重要的调控作用。由于IL-17主要由Th17产生,那么,Th17及其其他相关细胞因子(包括IL-23、IL-21、IL-22等)在慢性乙型病毒性肝病进展过程起什么作用?自体外周血干细胞治疗能否影响Th17以及IL-23、IL-21、IL-22等细胞因子?查阅文献尚未见相关研究报道。【目的】1.明确Th17及其相关细胞因子在慢性乙型病毒性肝病进展中的变化;2.探讨自体外周血干细胞治疗对乙肝肝硬化失代偿期患者外周血Th17及其相关细胞因子的影响。【方法】1.研究对象本研究方案经过我院伦理委员审核并批准。课题分两部分进行,所有对象均签署知情同意书。第一部分研究对象,包括健康志愿者、慢性乙型病毒性肝炎患者、乙肝肝硬化代偿期患者和失代偿期患者各50例。慢性乙型病毒性肝炎和乙肝肝硬化的诊断符合我国《病毒性肝炎防治方案》和《慢性乙型肝炎防治指南》诊断标准。第二部分研究对象,符合乙肝失代偿期肝硬化诊断标准、自愿在我科接受自体外周血干细胞移植治疗的20例患者。所有患者均随访至少1年,均有完整的基线资料和随访资料。2.实验样本对第一部分研究对象,采集其空腹状态时的外周血20ml。对第二部分研究对象,分别采集其接受干细胞治疗前及治疗后3月、6月和12月的外周血,每次20ml。所采集的血液样品置于肝素抗凝管中,即刻低速离心分离血细胞和血浆。所获血浆样品于液氮中快速冷冻后保存于-80℃备用。血细胞经淋巴细胞分离液分离,收获其中的单个核细胞,经程序化冷冻后保存于液氮备用。3.检测方法细胞因子检测:采用商品化ELISA试剂盒,按照说明书提供的方法检测血浆样本中的IL-17、IL-21、IL-22、IL-23。T细胞亚群检测:将冻存的单个核细胞解冻后置于培养板中,以PMA、Ionomycin和Monensin对细胞进行处理;以CD4、IL-17、IL-22、IFN-γ对细胞进行多重标记,并借助流式细胞仪分析Th17和Th22百分数。4.统计学分析借助SPSS 17.0软件进行。计数资料以均数±标准差表示,两组间比较采用t检验;计量资料采用Kruskal-Wallis H检验。p<0.05为有统计学意义。【结果】1.与健康志愿者相比,慢性乙型病毒性肝炎患者和乙肝肝硬化患者外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23水平均显著升高。并且,乙肝肝硬化患者外周血四种细胞因子的水平显著高于慢性乙型病毒性肝炎患者,乙肝肝硬化失代偿期患者四种细胞因子显著高于代偿期患者,差异均有统计学意义。2.与健康志愿者相比,慢性乙型病毒性肝炎患者和乙肝肝硬化患者外周血Th17和Th22百分数均显著升高。并且,乙肝肝硬化患者外周血Th17和Th22百分数显著高于慢性乙型病毒性肝炎患者,乙肝肝硬化失代偿期患者Th17和Th22百分数显著高于代偿期患者,差异均有统计学意义。3.随访分析表明,在接受自体外周血干细胞治疗3个月后,乙肝失代偿期肝硬化患者的肝功能指标(包括血浆白蛋白、转氨酶、总胆红素和MELD评分等)逐渐恢复正常。4.在接受自体外周血干细胞治疗3个月后,患者外周血IL-17、IL-21、IL-22、IL-23的水平逐渐降低,在治疗后6月时达到最低,与治疗前相比差异显著。并且,患者的IL-23水平与IL-17、IL-21、IL-22水平之间具有显著的正相关性。【结论】慢性乙型病毒感染后,随着疾病的进展,外周血Th17及其相关四种细胞因子均呈逐渐增高趋势;自体外周血干细胞治疗能够显著改善乙肝肝硬化失代偿期患者的肝功能,患者的外周血Th17及其相关细胞因子水平也随之显著降低。上述结果提示,Th17及其相关细胞因子可能在慢性乙型病毒性肝病发展过程中起着重要的促进作用,自体外周血干细胞移植有可能通过下调Th17及其相关细胞因子水平而促进乙肝肝硬化患者肝功能的恢复。