【摘 要】
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D抗原是所有血型系统中除A,B抗原之外最有效力的红细胞表面抗原,其对应的抗体为Rh(D)抗体,Rh(D)抗体具有很重要的临床意义。对于输血患者,会引起急性溶血性输血反应;对于D阳
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D抗原是所有血型系统中除A,B抗原之外最有效力的红细胞表面抗原,其对应的抗体为Rh(D)抗体,Rh(D)抗体具有很重要的临床意义。对于输血患者,会引起急性溶血性输血反应;对于D阳性胎儿,母体产生的Rh(D)抗体,能通过胎盘进入胎儿体内,引发新生儿溶血病(HDN)。可见研制Rh(D)抗体具有重要的临床应用价值。不过,由于小鼠的免疫系统不能识别单独的D抗原,无法采用传统的杂交瘤技术制备Rh单抗。本研究通过RT-PCR的方法,成功地从RH血型阴性血清Rh(D)抗体阳性患者的外周血淋巴细胞中扩增出人的Fab基因片断,将其克隆入噬菌粒载体pComb3中,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13超感染,构建了库容量为7.4×10~6的人源性Fab段噬菌体抗体库。利用Rh(-)RBC、Rh(+)RBC两种红细胞对构建好的噬菌体抗体库分别进行五轮“吸附-洗脱-扩增”的阴阳差异筛选,进行Rh(D)抗体的淘筛富集。获得1株表达Rh(D)抗体的阳性克隆,利用血凝试验和western-blot进行鉴定,结果表明克隆正确。经测序比对,VH属VH3-23亚群家族,Vκ属VκⅢ亚群Ⅸ家族。本研究通过克隆Fab基因构建了大库容量的人源性Fab段噬菌体抗体库,并通过淘筛法获得1株表达Rh(D)抗体的阳性克隆。为我国研制Rh(D)人源全分子IgG基因工程抗体和防治新生儿溶血病及溶血性输血反应的奠定了基础。
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