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本试验采用海扬黄鸡作为试验素材,建立了鸡肌肉中四环素(TC)、金霉素(CTC)、土霉素(OTC)、多西环素(DOXY)和替加环素(TGC)五种四环素类药物及差向四环素(ETC)、差向金霉素(ECTC)和差向土霉素(EOTC)三种代谢物多残留进行同时提取和同时检测的高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS),为鸡肌肉中四环素、金霉素、土霉素、多西环素、替加环素、差向四环素、差向金霉素和差向土霉素多残留确证检测方法的建立提供技术支撑。主要研究结果如下:1、建立并优化了同时提取鸡肌肉中TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC和EOTC多残留的样品前处理方法,该方法提取效率高,回收率均在88.95%以上,能够成功应用于鸡肌肉中TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC和EOTC多残留HPLC-MS/MS的检测。2、建立了鸡肌肉中 TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC 和 EOTC 八种目标分析物多残留同时检测的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)确证分析方法。色谱条件采用色谱柱为Waters SunFireTMC8(5 μm,50mm×2.1 mm i.d.),将甲醇和10 mmol/L三氟乙酸水溶液作为流动相并进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为28℃;质谱条件采用三重四极杆串联质谱,电喷雾离子源(ESI),正离子扫描,多反应监测模式(MRM)。空白鸡肌肉基质中 TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC 和 EOTC的添加浓度分别在 0.15-200μg/kg、0.13-200 μg/kg、0.16-200 μg/kg、0.12-200 μg/kg、0.19-200 μg/kg、0.17-200 μg/kg、0.16-200 μg/kg 和 0.18-200 μg/kg 范围内,TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC和EOTC的定量子离子的色谱峰面积分别与其浓度呈现出良好的线性关系,TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC和EOTC决定系数(R2)分别为 0.9999、0.9997、0.9998、0.9997、0.9997、0.9998、0.9998 和 0.9999。TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC和EOTC在空白鸡肌肉中的添加浓度分别为定量限(LOQ)、0.5 MRL、1.0 MRL和 2.0MRL 时,鸡肌肉中 TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC 和 EOTC 的平均回收率分别在89.61%-96.20%、89.43%-96.76%、90.97%-97.61%、91.37%-95.35%、88.95%-93.64%、90.37%-94.36%、93.26%-97.50%和89.53%-94.37%之间。相对标准偏差(RSD)均分别低于 3.96%、4.15%、4.42%、3.39%、3.19%、3.28%、3.10%和 3.51%;日内 RSD 均分别低于 3.79%、4.92%、4.01%、5.02%、3.82%、4.13%、4.01%和 4.52%;日间 RSD 均分别低于 5.96%、6.92%、5.87%、5.91%、5.76%、6.17%、6.51%和 6.94%;TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC和 EOTC 在鸡肌肉中检测限(LODs)分别为 0.09、0.06、0.08、0.08、0.07、0.08、0.06和 0.07 μg/kg;定量限(LOQs)分别为 0.15、0.13、0.16、0.12、0.19、0.17、0.16 和 0.18μg/kg;TC、CTC、OTC、DOXY、TGC、ETC、ECTC 和 EOTC 的确定限(CCα)和检测容量(CCβ)都在最高残留限量的附近。本试验建立的HPLC-MS/MS方法能满足鸡肌肉中五种四环素类药物(TC、CTC、OTC、DOXY和TGC)及三种代谢物(ETC、ECTC和EOTC)多残留同时确证检测的要求。