目的：构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库，从抗体库中筛选抗肝癌的噬菌体单链抗体(ScFv)，并对其进行鉴定和测序分析。 方法：体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体fuse5连接后，电击转化大肠杆菌MCl061，构建噬菌体呈现型ScFv库。用人肝癌细胞及人肝细胞对初级噬菌体抗体库进行亲和富集及phage—ELISA筛选。筛选获得的阳性克隆进行ELISA及免疫组化鉴定并测序。 结果：经EBV转化的4例肝癌患者PBMC，ELISA检测均有抗肝癌抗体产生，经多次PCR，扩增出6种VH(Y、μ)和9种VL(K、λ)基因，经连接组成54种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后，导入大肠杆菌MCl．061。经四环素抗性筛选，得到库容为1.0×10<8>的初级噬菌体抗体库，噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为80[％]。用人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系QSG-7701对抗体库进行三轮正负淘选和富集后，从中随机挑取533个克隆进行ELISA筛选，得到179个阳性克隆，阳性率为33.6[％]。将179个阳性克隆进一步进行其他细胞系的鉴定，发现克隆A82对肝癌细胞系HepG2、人胚肾上皮细胞系HEK293呈强阳性反应，而与正常肝细胞系QSG-7701、骨髓间质干细胞HBMSC、原代培养的脐静脉内皮细胞HUVEC及其他人肿瘤细胞系反应呈弱阳性或不反应。细胞免疫组化结果与细胞ELISA结果基本一致；免疫组织化学结果显示与人肝细胞癌组织有特异性反应，而不与正常肝组织反应，反应部位主要见于胞膜、胞浆。对克隆A82进行测序分析，结果表明：A82全长742bp，含linker cDNA序列45bp，重链可变区基因与人胚系IgVH3-23有94.3[％]的同源性，轻链可变区基因与人胚系IgV4-2有94.9[％]的同源性；V-D-J分别属于 VH3-23-D2-21-JH6-linker-V4-2-JL2。 结论：应用体外抗原致敏方法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术，构建库容量达1×10<8>的全人源抗肝癌单链抗体库。通过细胞ELISA和免疫组化鉴定，获得的噬菌体抗体克隆A82具有较强的特异性，为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。