溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)又称慢性非特异性溃疡性结肠炎。其临床表现以腹痛腹泻、粘液脓血便、消瘦发热为主。该病病因尚不清楚,一般认为是多因素驱使下发生的,主要是由于肠道微生物在遗传性易感宿主上发生的不适当免疫应答。溃疡性结肠炎的发病机制涉及许多方面,一般认为溃疡性结肠炎是由结肠黏膜慢性炎症导致的:①上皮屏障被破坏;②肠道致病菌破坏肠道内肠道耐受菌群免疫系统平衡;③免疫反应失调;④遗传因素。我们深入研究该疾病首先需要建立恰当的动物模型。随着祖国医学的不断发展,中药治疗溃疡性结肠炎方面取得了一定效果,且不良反应少。大黄作为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根和根茎,其性寒,味苦,能泻热通便,凉血解毒,逐瘀通经。研究表明大黄具有保护消化道黏膜和抗消化道黏膜损伤作用,大黄蒽醌类成分有抑菌抗炎作用。此外,大黄蒽醌可以修复肠道黏膜屏障的损伤,其机制是通过改善肠道微循环、抑制机体炎症反应和肠黏膜上皮细胞损伤。因此大黄治疗溃疡性结肠炎有较高的理论意义和实用价值。本研究旨在考察大黄栓剂对2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)和噁唑酮(Oxazolone,OXZ)诱导的小鼠溃疡性结肠炎作用机制。柳氮磺胺吡啶(Sulfasalazine,SASP)对肠壁有抗菌消炎和免疫抑制的作用,是目前临床治疗溃疡性结肠炎的常用药物,所以其为本实验的阳性对照药。栓剂不仅具有润滑、收敛、抗菌消炎作用,而且还可以通过直肠吸收发挥全身作用,并且可以避免肝脏的首过作用,所以我们选用以半合成脂肪酸甘油酯(Semi-synthetic fatty acid glycerides,SSFAG)为基质的栓剂对小鼠溃疡性结肠炎给药治疗。本实验选用448只健康昆明种小鼠(♂),TNBS和OXZ分别诱导小鼠溃疡性结肠炎模型。1大黄质量检测及大黄栓剂和柳氮磺胺吡啶栓剂的质量控制对所用大黄分别进行性状鉴别、薄层色谱和高效液相检测。通过对两种模型小鼠和健康小鼠体温测定,确定所用栓剂基质半合成脂肪酸甘油酯36型和38型比例。按照工艺流程:熔融基质→注模→灌药→封顶→刮削→起模→脱模进行制备。并按照中国药典(chinesepharmacopoeia,chp)第二部附录Ⅰd栓剂制剂通则对各类型栓剂进行重量差异和融变时限检测。结果显示,大黄的质量符合chp(2010版)规定。大黄栓剂和sasp栓剂重量差异融变时限均达到chp(2010版)规定。大黄800mg·kg-1栓剂、大黄400mg·kg-1栓剂、大黄200mg·kg-1栓剂的溶出度依次增大,大黄200mg·kg-1栓剂的溶出度较高。2大黄栓剂对tnbs诱导的uc模型小鼠的作用研究选用224只健康昆明种小鼠(♂),随机分为7组(n=32),Ⅰ模型组、Ⅱsasp栓剂组、Ⅲ大黄800mg·kg-1栓剂组、Ⅳ大黄400mg·kg-1栓剂组、Ⅴ大黄200mg·kg-1栓剂组、Ⅵ空白栓剂组、Ⅶ溶剂对照组。Ⅰ~Ⅴ对小鼠进行tnbs诱导uc造模:0.6%tnbs溶液0.1ml灌肠;Ⅶ溶剂对照组:50%乙醇0.1mll灌肠;Ⅵ空白栓剂组:不作处理。灌肠给药一次后在d1,d2,d3,d5,d7每组处死6只。每组小鼠分别在灌肠造模后的每晚给予相应栓剂,每日检测体重、腹泻和粪便潜血情况。检测疾病活动指数(diseaseactivityindex,dai)、结肠组织大体损伤指数(colonmacroscopicdamageindex,cmdi)和病理组织学评分(histopathologicalscore,hps),并检测小鼠结肠组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase,mpo)活性、白细胞介素-4(interleukin-4,il-4)含量、肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,tnf-α)水平。与溶剂对照组比较,模型组的dai、cmdi、hps评分和mpo酶活性在d1,d2,d3,d5,d7显著降低(p<0.01,p<0.01,p<0.01,p<0.01),tnf-α表达和il-4含量也出现显著差异(p<0.01,p<0.01);与空白栓剂组比较,含药栓剂组在d1,d2,d3,d5,d7显著降低(p<0.01,p<0.01,p<0.01,p<0.01);与sasp栓剂组比较,大黄200mg·kg-1栓剂或能明显改善uc小鼠的dai、cmdi、hps评分和mpo酶活性,tnf-α的表达也相应明显减少,il-4含量有差异。3大黄栓剂对OXZ模型小鼠的作用研究选用224只健康昆明种小鼠(♂),分组同上。Ⅰ~Ⅴ对小鼠进行OXZ诱导UC造模:皮肤涂抹1%OXZ溶液(100%乙醇溶解)0.1mL每天一次,连续2d(致敏),d 7以0.5%OXZ(50%乙醇溶解)0.1ml灌肠;Ⅶ溶剂对照组皮肤涂抹100%乙醇0.1mL,每天一次,连续2d,d 7以50%乙醇0.1mL灌肠;Ⅵ空白栓剂组:不作处理。灌肠给药一次后分别在d 1~d 5每天处死6只小鼠。每组小鼠在灌肠造模后进行检测,同TNBS组。与溶剂对照组比较,模型组的DAI、CMDI、HPS评分和MPO酶活性在d1,d2,d3,d4,d5显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01),TNF-α表达和IL-4含量也出现显著差异(P<0.01,P<0.01);与空白栓剂组比较,含药栓剂组在d1,d2,d3,d4,d5显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01);与SASP栓剂组比较,大黄200mg·kg-1栓剂或能明显改善UC小鼠的DAI、CMDI、HPS评分和MPO酶活性,IL-4含量也相应明显减少,TNF-α的表达有差异。实验中所做栓剂理化性质稳定符合药用栓剂的质量要求。TNBS及OXZ均能复制小鼠UC模型,但是两种模型各有其特点,其中TNBS诱导的小鼠溃疡性结肠炎以辅助性T1型炎症反应为主,OXZ诱导的小鼠溃疡性结肠炎以辅助性T2型炎症反应为主。大黄栓剂对这两种药物诱导的UC小鼠均有治疗作用,而且大黄200mg·kg-1栓剂效果较好,但是不及SASP栓剂。