以小干扰RNA抑制亚铁螯合酶诱导卵巢癌细胞原卟啉Ⅸ积聚的肿瘤荧光检测技术研究

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目的:应用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜检测siRNA下调FECH表达对细胞内原卟啉Ⅸ积聚的影响,以及联用小剂量ALA对PpIX产生的荧光强度的改变,探索以siRNA为基础的FECH抑制剂在肿瘤荧光成像诊断和治疗中的意义,为进一步进行体内研究和肿瘤的光敏治疗奠定基础。方法:1.卵巢癌HO8910PM细胞的培养;2.设计并合成靶向FECH的siRNA,用脂质体转染剂Lipofectamine 2000携带后转染HO8910PM细胞;3.用RT-PCR半定量检测细胞中FECH mRNA的表达;4.实验分:①空白对照组(未经任何处理的HO8910PM细胞)、②siRNA组、③0.1mMALA组、④0.1mM ALA+siRNA组、⑤0.5mM ALA组、⑥0.5mM ALA+siRNA组、⑦1mM ALA组、⑧1mM ALA+siRNA组、⑨正常组织上皮细胞0mMALA组空白对照、⑩正常组织上皮细胞1mM ALA+siRNA组,分别运用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜在体外检测HO8910PM细胞的荧光强度。结果:1.转染后细胞的FECH mRNA的表达水平低于未转染组,敲减效率为70.1%(vs转染剂组);2.荧光显微镜成像图显示:随ALA浓度的增高,红色荧光逐渐增强;同一ALA浓度下siRNA干扰后,其红色荧光增强;3.0. 1mMALA联合应用FECH-siRNA为能观察到特异红色荧光的最小浓度;4.②组(135.0307±7.84902)、④组(201.6248±7.36810)、⑥组(361.8257±55.79851)、⑧组(655.9286±72.31014)荧光含量值分别与①组(115.3773±4.53428)、③组(130.6456±11.54809)、⑤组(259.9907±31.33794)、⑦组(388.2075±64.03168)比较,差异有统计学意义(P均<0.01)。结论:1.化学合成的靶向FECH的siRNA能够下调HO8910PM细胞中FECH基因的表达,从而增加PpIX积聚,并且与小剂量ALA联合应用具有协同效应;2.ALA联合应用FECH-siRNA使肿瘤细胞发出红光的最小浓度是0.1mM。
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