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采用各种展示文库筛选肿瘤细胞特异性抗体在二十世纪八、九十年代就已经开始。但是，针对肿瘤细胞筛选到的这些抗体的抗原鉴定则较困难。虽然筛选到了一些肿瘤细胞特异性抗体，但是只有少部分抗体所识别的抗原被鉴定出来。其主要原因是蛋白质微量鉴定技术发展滞后。蛋白质组学的出现催生了许多新技术，其中质谱技术的发展使得其在蛋白质的分析和鉴定中发挥着不可替代的作用。PMF或者LC-MS／MS是目前最常用的蛋白质质谱鉴定技术。 scFv N14抗体是我们针对HepG2细胞筛选得到的一株单链抗体。该抗体能特异识别HepG2肝癌细胞，而对正常肝细胞株L02细胞反应较弱。本研究的目的是利用蛋白质组学相关技术，鉴定scFv N14抗体所识别的抗原，分析该抗原与肝癌发生、发展之间的关系。 首先，利用pET-scFv N14原核表达载体转化大肠杆菌E．coli BL 21(DE3)LysS细胞，实现了scFv N14抗体的高表达。表达的scFv N14以包涵体形式存在。包涵体经裂解后，采用金属离子螯合柱辅助复性技术实现了scFv N14抗体的有效复性。利用纯化的抗体，通过Western blot实验证明，scFv N14抗原在HepG2肝癌细胞中的表达量要高于正常肝细胞株L02细胞中的表达量；采用免疫细胞化学技术分析了scFv N14抗原的亚细胞定位，结果显示，scFv N14抗原主要定位于细胞核。 由于scFv N14抗原的细胞核定位，我们选取HepG2肝癌细胞的细胞核蛋白作为scFv N14抗原鉴定的起始材料。通过一维电泳和Western blot(1D／WB)实验发现，scFv N14能够特异地识别HepG2细胞核蛋白组份中分子量约37kD和35kD的两个蛋白条带。通过Q-TOF对这两个蛋白条带中的蛋白进行了鉴定，其中37kD条带中的蛋白可能是annexin A2 isoform 2、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、hnRNP protein A2和mutant beta-actin(beta′-actin)；35kD条带中的蛋白则可能是hnRNP A2、unnamed protein product和transformation upregulated nuclear protein。由于两条带中包含的蛋白均有hnRNPA2，而编码hnRNP A2的基因能够通过不同的mRNA剪切方式编码hnRNP A2和hnRNP B1两种蛋白，hnRNP B1比hnRNP A2的N末端多12个氨基酸。所以，很可能37kD条带中的蛋白是hnRNP B1，35kD条带中的蛋白是hnRNPA2，而scFv N14抗体能够同时识别hnRNP A2和hnRNP B1。为了确证这一推测，我