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预处理不但对缺血性损害产生保护效应，而且对多种损伤如创伤、烧伤、氧化应激、活性氧(reactive oxygen species，ROS)等也能产生保护效应。心肌缺血预处理对心肌具有明显的保护作用，但至今仍未找到一种临床上满意的预处理方法。新近研究发现，mitoK(ATP)通道开放剂(KCOs)可以模拟缺血预处理样效应，保护心肌收缩功能，显著缩小心肌梗死范围。如同时给予特异性的mitoK(ATP)通道阻断剂(5-HD)时，这种保护作用消失。mitoK(ATP)通道的开放是预处理保护作用的靶点之一。但其保护作用的机制尚未阐明。 ROS是缺血再灌注损伤的重要致损因素，在短暂缺血时产生的适量自由基却可明显减轻随后严重缺血造成的心肌梗塞，其作用可能与触发机体的应激反应、产生少量ROS、刺激mitoK(ATP)通道提前开放有关，基于吡那地尔(Pinacidil，PIN)是一种K(ATP)开放剂，我们推测，如果在损伤前给予适量的Pinacidil，使mitoK(ATP)通道提前开放，可能对损伤心肌产生一定保护效应。基于上述推论，本实验拟用Pinacidil预处理，观察其是否对烫伤大鼠心肌产生保护作用，并进一步探讨其作用机制，为心肌损伤的预防和治疗提供实验依据。 材料和方法 1．体内实验：将Wistar大鼠随机分为正常对照组，烫伤组(单纯给予烫伤)，Pinacidil预处理组(先用Piancidil预处理后再烫伤)，每组8只动物。腹腔注射Pinacidil(50μg／kg)或等容量的生理盐水(Ns)，完成预处理过程。半小时后复制大鼠Ⅲ°TBSA 30％烫伤模型。通过右颈总动脉插管监测大鼠血流动力学和心脏功能指标；差速离心法提取心肌线粒体检测大鼠心肌线粒体呼吸功能，MDA、超氧阴离子含量；电镜观察大鼠心肌线粒体超微结构的改变。研究Pinacidil预处理对严重烫伤大鼠的心肌保护作用以及对心肌线粒体结构和功能的影响。第三军医大学博士学位论文 2.体外实验:培养心肌原代细胞，分别按照lxl05闹或5x10今而的密度接种于含有盖玻片的24或96孔培养板中，实验分4组:正常对照组、H20:组(4 00 0 mo比HZoZ)、P创组预处理组(HZoZ组+1 X 10一moFL Pinacidil)、5一HD组(Pm组+xx10一4mo比5一HD)、每组3个复孔。Pianeidil预处理药物提前半小时给予。用M仃检测心肌细胞活力;免疫组化法检测心肌线粒体细胞色素C的释放情况;激光共聚焦法测定线粒体膜电位。主要结果 1.严重烫伤大鼠血流动力学和心功能的变化特征及Pinacidil预处理对烫伤大鼠的影响 严重烫伤后，大鼠收缩压(sP)、舒张压(DP)、平均动脉压(MAP)急剧下降，与烫伤前比较差别显著(P<0.01)，烫伤后1h有所回升，但没有恢复到正常水平，烫伤后3h、6h又呈逐渐下降趋势。Pinacidil预处理组严重烫伤后血压虽然也有下降，但下降幅度较烫伤组明显减轻。两组大鼠心率在烫伤后并没有加快，而是减慢。烫伤组心率从烫伤后开始呈进行性下降，P水组亦呈逐步递减趋势，但较烫伤组明显减轻(P<0.05一0 .01)。 心室收缩压在大鼠烫伤后立即显著下降，并持续维持在低水平，和烫伤前比较有显著性差异，尤其到了6小时后，差别更明显;PIN组心室收缩压在烫伤后也有明显下降，但下降幅度较烫伤组轻。烫伤后各时相点P创组的LVSP与烫伤组比较，尸均<0.01。LVEDP的变化规律和LVSP相反，LVEDP烫伤后明显升高。PIN组虽然在烫伤后明显增高，但增高的幅度与烫伤组比较有所减轻(P<0 .05~0.01)。 烫伤后即刻+dP/d tmax、一dP/cttmax均显著下降，虽然烫伤lh后有所回升，但以后又呈进行性下降。P水组呈相似的变化趋势，但下降幅度明显减少。在相应的各时相点，两组比较有显著差异(P<0.05~0.01)。烫伤后t~dp/dtmax呈进行性的延长，烫伤后lh、3h、6h和烫伤前比较均有显著差异(P<0.05~0.01)。PIN组在烫伤后t一dP/drmax立即延长，于lh后明显缩短，和烫伤前比较没有差异。但于烫伤后3h、6h又延长。与烫伤组比较，其延长幅度明显减轻(P<0.05~0.01)。 2.严重烫伤大鼠心肌线粒体呼吸功能变化和Pinacidn预处理对其的影响 烫伤后各时相点大鼠心肌线粒体呼吸控制率均明显降低，直到烫伤6小时后仍然没有恢复。和正常组比较有非常显著的差异(P<0.01)。Pinacidil预处理组在烫伤后心肌线粒体呼吸控制率的降低幅度明显减轻。两组间比较p<0.05·0.01。第三军医大学博士学位论文 3.严重烫伤大鼠线粒体MDA和超氧阴离子变化和Pinacidil预处理的影响 MDA含量在烫伤后1小时明显增加，和对照组比较有显著差异(p<0 .05)，烫伤后3h、6h增加更为显著(p<0.01);Pinaeidil预处理组MDA增加程度有所减轻，且升高的时间明显后延。和对照组比较，烫伤后6小时才出现显著性差异(P<0.01)。和烫伤组比较，烫伤后3h、6h MDA有明显差异伊<0.05一0.01)。 超氧阴离子含量在烫伤后呈逐渐递增趋势，和对照组比较在烫伤后各相应时相点均有显著差异(P<0.01);Pinacidil预处理组超氧阴离子增加缓慢，和对照组比较，烫伤后3小时才出现显著性差异(p<0.01)。和烫伤组比较，PIN组在烫伤后各相应时相点超氧阴离子含量均明显下降(P<0.05一0.01)。 4.严重烫伤大鼠心肌线粒体电镜结构的改变和Pinacidil预处