新疆苹果枝枯病病原菌的分离和鉴定及菌株的遗传多样性分析

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我国果树资源丰富,尤其是新疆地区有很多特色水果,库尔勒香梨产业是新疆地区的重要产业之一,香梨远销海外,深受欢迎。2016年6月,在新疆维吾尔自治区伊犁州的苹果、梨上发现一种新的、危害性极大的病害。每年4月底或5月初发病,可以迅速使枝干、花器及果实等变黑枯死,环境适宜时,病部还可以产生大量菌浓,根据发病特点,暂时将此病害命名为“苹果枝枯病”。至今,在伊犁州10万亩寄主树种中,发病率达到了 30%,对新疆地区的水果产业造成了严重的影响。本研究中,我们分离鉴定出了新疆苹果枝枯病的病原物,并且对不同地理位置菌株进行了致病力相关的遗传多样性分析,推测了我国苹果枝枯病菌的可能来源以及与国外菌株间的亲缘关系,为更全面的了解国内苹果枝枯病的特性,及时采取措施防治病害的传播侵染,减少我国水果产业的损失提供一定的参考。主要有以下研究成果:首先,为了确定引起新疆苹果枝枯病的病原物,我们从发病的113份组织材料中通过平板分离、烟草过敏性反应和致病性测定的方法得到了 146个分离物,从中选取了 14个代表菌株进行鉴定。通过biolog微生物鉴定、多位点序列分析构建系统发育树以及利用梨火疫病菌特异性引物p29A/B对菌株进行了 PCR鉴定,最终确定了造成新疆苹果枝枯病的病原物为Erwinia amylovora。其次,为了研究我国新疆苹果枝枯病菌株与国外梨火疫菌株的亲缘关系,我们选取了 14株新疆苹果枝枯病菌株、3株吉尔吉斯斯坦梨火疫菌株、2株哈萨克斯坦梨火疫菌株、5株欧洲梨火疫菌株、和7株亚洲梨火疫(Erwinia pyrifoliae)菌株,共计31个菌株作为试验材料,进行致病力方面的遗传多样性实验分析。结果发现,新疆苹果枝枯病菌在生长速率、致病性、游动性、梨火疫毒素分泌等方面与吉尔吉斯斯坦和哈萨克斯坦菌株都十分相近,而与欧洲菌株差异较大。在H2O2敏感性测定中,亚洲梨火疫菌株对H2O2的敏感性更强,较低浓度下就会抑制菌株的生长,而新疆苹果枝枯病菌株与欧洲菌株、吉尔吉斯斯坦和哈萨克斯坦菌株更相近,对H2O2的耐受性较高,且差异不明显。对菌株进行biolog测定,当碳源为龙胆二糖(Gentiobiose)、D-甘露醇(D-Mannitol)、D-葡糖-6-磷酸(D-Glucose-6-PO4)、L-谷氨酸(L-Glutamic Acid)、L-苹果酸(L-Malic Acid)这5种时,中国新疆菌株、吉尔吉斯斯坦和哈萨克斯坦菌株只能利用D-甘露醇;亚洲梨火疫菌株可以利用D-甘露醇和L-苹果酸2种碳源;欧洲菌株可以利用这全部的5种碳源。通过聚类分析构建碳源利用的树状图,发现可以分成两个分支,参试菌株NCPPB1665与欧美地区菌株碳源利用上更相近,聚为一支;新疆苹果枝枯病菌与吉尔吉斯斯坦菌株、哈萨克斯坦菌聚为另一支。以上研究说明新疆苹果枝枯病菌在致病力、游动性、过氧化氢耐受性等方面都与吉尔吉斯斯坦、哈萨克斯坦梨火疫菌株相近,且比较高,但与欧洲菌株差异较大,亲缘关系相对较远。以上研究,发现了我国新疆地区存在的梨火疫病害,探索了该病菌可能的来源,研究了病菌致病力相关的遗传特性。可以帮助我们快速了解该病害的特点,采取有效的防控手段,控制病害的传播侵染,减少对水果产业的危害,减轻经济损失。
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