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鸡马立克氏病(Marek’s disease，MD)是危害养鸡业的主要传染病之一。该病以T淋巴细胞增生性肿瘤、高度接触性传染以及造成鸡的严重免疫抑制为特征，其病原为鸡马立克氏病病毒(Marek’s disease virus，MDV)，该病毒属疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科双链DNA病毒，基因组大约180kb。根据抗原性不同，马立克氏病病毒(MDV)可分为3种血清型，血清1型包括所有致瘤的马立克氏病病毒，含强毒及其致弱的变异毒株；而血清2型包括所有不致瘤的马立克氏病病毒；血清3型包括所有的火鸡疱疹病毒(Herpesvirus ofturkey，HVT)及其变异毒株。由于MDV是严格的细胞结合病毒，对MDV基因组进行基因操作和研究十分困难。近几年细菌人工染色体技术的出现解决了这一难题。首先构建MDV细菌人工染色体(BAC)，然后利用分子克隆化病毒BAC质粒转染哺乳动物细胞，启动病毒感染，产生纯系重组病毒。BAC分子克隆化病毒服从大肠杆菌基因操作技术，在大肠杆菌中可以对其进行方便的基因操作和研究。尤其是利用近几年来发展起来的现代DNA克隆技术——RED／ET技术，它可以在细菌中对病毒基因组实施快速有效的各种修饰(删除、插入和点突变)，甚至对病毒基因组的必需基因进行有效的突变。本研究的目的是构建鸡马立克氏病病毒814株全基因组感染性分子克隆化病毒—细菌人工染色体，建立鸡马立克氏病病毒的反向遗传操作技术平台。首先利用自主构建的表达Eco-gpt的哺乳动物细胞基因转移遗传选择标记(1.3kb)和带有细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosomes，BAC)基本基因功能序列(pBeloBACll，7.5kb)成功构建了鸡马立克氏病病毒重组病毒转移载体pUAB-gpt-BACll，使用脂质体转染技术，将转移载体与马立克氏病病毒感染CEF细胞的总DNA共转染鸡胚成纤维细胞，启动病毒感染后，在选择培养基的遗传选择加压条件下，经八轮筛选、富集并完全纯化了重组病毒；适时提取环化重组病毒感染CEF细胞的总DNA，电转化大肠杆菌DHl0B，挑取阳性克隆经酶切图谱、凝胶电泳和PCR鉴定BAC分子克隆化病毒，经鉴定获得了38个BAC分子克隆化病毒，并且用编号为MDV-BAC2的克隆提取纯化的BAC-DNA转染次代CEF细胞，再次启动了病毒感染，产生了MDV特异性病毒蚀斑，拯救出了重组病毒；进一步研究表明重组病毒rv-MDV814、野生病毒wt-MDV814与拯救的重组病毒BAC-redrived MDV814三种病毒在体外鸡胚成纤维细胞上的生物学特性相似；进一步的动物试验研究表明rv-MDV 814、BAC2-derived MDV 814、PBS-BAC2-DNA、LiD-BAC2-DNA、Ca-BAC2-DNA、活菌-BAC2免疫鸡部分能够抵抗J-1株强毒的攻击，表明BAC-based疫苗具有作为预防鸡马立克氏病新型疫苗进行开发的潜力。本研究为进一步研究鸡马立克氏病病毒的致瘤机制、潜伏机制和基因功能提供了很好遗传操作技术平台，添补了国内空白，同时也为以马立克氏病病毒毒细菌人工染色体为基础的新型基因工程疫苗的开发和应用提供了强大的技术平台。