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研究背景干扰素/维甲酸诱导凋亡相关基因-19(gene associated with retinoid-IFN-induced mortality-19,Grim-19),是2000年由Angell等应用反义基因敲除的方法分离发现的一种细胞凋亡调节因子。在一些原发性肾细胞肿瘤和泌尿生殖系肿瘤中Grim-19表达缺失或被严重抑制,用肾细胞肿瘤细胞系的研究证实Grim-19的下调通过增强依赖Stat3(signal transducers and activators of transcription 3)基因的表达而促进肿瘤生长,并且首次表明Grim-19具有肿瘤抑制因子作用。Maximo等证实甲状腺Hurthle细胞肿瘤病例携带有Grim-19基因的突变。而对肺癌组织中Grim-19基因及蛋白表达水平的研究,国内外尚未有报道。本研究采用RT-PCR(Reverse transcript–polymerase chain reaction)及real time RT-PCR检测40例肺癌组织中Grim-19基因水平的表达,RT- PCR检测Stat3及其下游靶基因Bcl2、CyclinB1、CyclinD1、c-Myc基因水平的表达,Western blot验证20例肺癌组织中Grim-19蛋白表达水平,分析Grim-19基因水平的表达与临床病理特征之间的关系,并进一步探讨Grim-19在肺癌发生发展中的意义。目的本研究以人肺癌组织及癌旁组织为材料,检测Grim-19、Stat3及其下游靶基因Bcl2、CyclinB1、CyclinD1、c-Myc在肺癌及癌旁组织中的基因与蛋白水平表达情况,并分析Grim-19基因水平表达与临床病理特征之间的关系,以期探讨Grim-19在肺癌发生发展中的意义。方法1. RT-PCR检测40例肺癌患者的癌组织和癌旁组织中Grim-19、Stat3及其下游靶基因Bcl2、CyclinB1、CyclinD1、c-Myc基因水平的表达分别抽取40例患者肺癌组织及癌旁组织中的总RNA,然后采用RT-PCR法分别检测Grim-19 mRNA、Stat3及其下游靶基因Bcl2、CyclinB1、CyclinD1、c-Myc表达的变化2. real time RT-PCR检测40例肺癌患者的癌组织和癌旁组织中Grim-19基因水平的表达分别抽取40例患者肺癌组织及癌旁组织中的总RNA,然后采用real time RT-PCR法分别检测Grim-19基因水平表达的变化3.用Western blot法验证20例肺癌组织中Grim-19蛋白表达情况分别抽取20例患者肺癌组织及癌旁组织中的总蛋白,然后采用Western Blot法分别检测Grim-19蛋白表达的变化。4.分析肺癌组织中Grim-19基因水平的表达与临床病理参数之间的关系将肺癌组40例临床标本Grim-19基因水平的表达量按组织学类型、临床病理分期、性别、年龄、吸烟指数等参数进行分组,然后分析Grim-19基因水平的表达与临床病理参数之间的关系。5.统计方法所有试验至少分3次独立完成,数据用均数±标准差表示。多组间的差异用one-way ANOVA分析,两组之间的差异用t检验,统计在SPSS 15.0软件统计包中进行,P<0.05表示差异有显著性。结果1.肺癌及癌旁组织Grim-19、Stat3及其下游靶基因Bcl2、CyclinB1、CyclinD1、c-Myc基因水平的表达水平检测RT-PCR、real time RT-PCR结果均表明:肺癌组与癌旁组相比,Grim-19基因表达水平有明显改变;肺癌组Grim-19基因表达水平均低于其在相对应的癌旁组的表达,RT-PCR结果发现Stat3及其下游靶基因Bcl2、CyclinB1、CyclinD1、c-Myc基因表达水平在肺癌组织中均高于其在癌旁组织中的表达。2.肺癌及癌旁组织Grim-19蛋白水平检测Western Blot结果表明:肺癌组与癌旁组相比,Grim-19蛋白表达水平有明显差异;肺癌组Grim-19蛋白水平低于其在相对应的癌旁组的表达,并且蛋白表达的相应下降与基因表达水平的降低相一致。3.肺癌组织中Grim-19基因水平的表达与临床病理参数之间的关系将肺癌组40例临床标本Grim-19基因水平的表达量按组织学类型、临床病理分期、性别、年龄、吸烟指数等参数进行分组,在不同的临床病理分期中,I–II期Grim-19基因水平的相对表达量显著高于III-IV期的表达,差异有统计学意义;而肺癌组织中Grim-19基因水平表达量与其性别、年龄、吸烟指数、组织学分型等参数无统计学差异。结论1.肺癌组Grim-19基因水平及蛋白水平均低于其在相对应的癌旁组的表达,并且基因表达水平的降低伴随有蛋白表达的相应下降;2.在肺癌组不同的临床病理分期中,I–II期Grim-19基因水平相对表达量显著高于III-IV期的表达;而与性别、年龄、吸烟指数及组织学分型等无明显相关性。3.肺癌组织中Stat3及其下游靶基因Bcl2、CyclinB1、CyclinD1、c-Myc基因表达水平均高于其在癌旁组织中的表达。并且在肺癌组织中存在Stat3高表达与Grim-19低表达的共存。4. Grim-19基因水平的表达下降是肺癌发生过程中的重要事件,可能与肺癌的发生及进展有关。