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百合(Lilium spp.)是单子叶植物亚纲百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生球根花卉,是国际上十分畅销的花卉之一。传统的百合繁殖方法主要采用常规分球、分珠芽、鳞片扦插、鳞片包埋等。但采用这些方法,繁殖系数较小,特别是经多代分殖以后,常造成种性退化,甚至病毒积累,影响百合的产量和质量。利用组织培养技术,能够迅速去除病毒和更新品种,加快了百合的快速繁殖速度,缩短了百合的生育周期。原生质体研究成功始于1971年Takebe等首次报道烟草叶肉原生质体培养得到再生植株,由于同一植株获得的原生质体在遗传上是同质的,可为细胞生物学、发育生物学、细胞生理学、细胞遗传学及其他一些生物学科提供良好的实验体系;原生质体能够克服性细胞的不亲和障碍,进行远缘的体细胞杂交;原生质体可以直接摄取外源的DNA、细胞器、病毒、质粒等,是进行遗传转化研究的理想受体,因此植物原生质体在改变植物遗传性、改良作物品种的应用研究以及生物学的基础理论研究中有着广泛的用途。但是,原生质体分离及培养难度很大,目前原生质体培养获得成功的种数有限,在国内还没有人通过百合原生质体培养获得再生植株,因此急需我们进一步研究,填补国内空白。本试验以三种百合(东方百合“Bernini”、亚洲百合“Elite”、卷丹)为材料,建立百合直接分化再生系统和愈伤组织再生系统,以此为基础建立百合原生质体分离及纯化体系。研究结果如下:1.建立了百合直接分化再生系统和愈伤组织再生系统:以鳞茎为外植体,芽分化培养基为MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.1mg/L+NAA 1.0mg/L,试管苗最适生根培养基为MS+IBA0.5mg/L;以花丝为外植体,最适愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D2.0mg/L+水解乳蛋白300mg/L,分化培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+KT 0.1mg/L+NAA 1.0mg/L,最适生根培养基为MS培养基。2.本试验选用甘露醇为渗透压稳定剂,采用质壁分离方法确定了百合叶片的渗透压为0.6mol/L。3.通过试验得出百合叶片酶解的最佳时间为2h,酶液的最佳配比浓度为Cellulase“Onzuka”RS(纤维素酶)2%+Pectinase Y-23(果胶酶)0.1%+Macerozyme R-10(离析酶)0.5%+CaCl2·2H2O 10mM+MES 5mM+甘露醇0.6mol/L,pH5.6;酶解的条件为:黑暗下25℃,于摇床上振荡酶解(40rpm)。4.试验中酶解前对叶片进行预处理有效的提高了原生质体的产量和活力。通过多种预处理方法比较得出最佳预处理方法为13%甘露醇预处理90min,东方百合“Bernini”原生质体产量提高了32.5%,原生质体活力提高了8.41%;亚洲百合“Elite”原生质体产量提高了18.07%,原生质体活力提高了9.52%;卷丹原生质体产量提高了20.25%,原生质体活力提高了5.95%。诱导愈伤组织培养基预培养对百合叶片原生质体产量没有太大的影响,但对原生质体的活力影响较大,东方百合“Bernini”提高了14.18%,亚洲百合“Elite”提高了5.95%,卷丹提高了8.33%。黑暗处理和低温处理对供试三个品种百合叶片原生质体的产量及活力影响不大。5.通过多种培养方法比较得出最适合百合叶片原生质体培养的方法为固液结合培养,固