大鼠甲醇中毒后视网膜电图反应及αB晶状体蛋白、ALDH2和ATP5A1的变化及相关性

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目的:研究甲醇中毒后αB晶状体蛋白、ALDH2和ATP5A1在视网膜、玻璃体液中的表达以及视网膜电图反应(electroretinogram, ERG)的变化规律,初步探索两者之间的关联性。方法:将SD大鼠分为对照组(A组)、中毒3天组(B组)和中毒7天组(C组)。于相应时间点分别记录视网膜电图反应,利用色谱法检测心血中甲醇、甲酸浓度以及组织中的甲酸浓度。通过Western blot方法验证aB晶状体蛋白、ALDH2和ATP5A1在视网膜、玻璃体中的表达。结果:①ERG的视杆反应,B组的a波和b波振幅分别下降至对照组的53%和37%(p<0.05),C组仅b波振幅约下降至对照组的48%(p<0.05)。最大混合反应,B组的a波和b波振幅分别下降至对照组的53%和40%(p<0.05),C组仅b波振幅约下降至对照组的44%(p<0.05),B组a波的潜伏期延迟了26%(p<0.05),C组仅a波潜伏期延迟了28%(p<0.05)。振荡电位反应,B组和C组的总振幅分别下降至对照组的53%和57%(p<0.05),总时程分别延迟15%和60%(p<0.05),与对照组相比,B组的OS1、OS3、OS4和OS5以及C组的OS3、OS4、和OS5的波幅均降低(p<0.05),且B组和C组之间OS1之间的差异具有统计学意义(p<0.05)。与对照组相比,B组的峰间隔IPI1和C组的IPI1-4均增宽(p<0.05),而且C组的IPI1-4比B组增宽的更为明显(p<0.05)。视锥反应,B组a波和b波的振幅分别下降至对照组的53%和40%(p<0.05),C组仅b波的振幅下降至对照组的69%(p<0.05),B组和C组之间b波振幅的差异具有统计学意义(p<0.05),C组a波和b波潜伏期分别延迟了29%和9%(p<0.05)。②在中毒组,B组的甲醇血浓度为1.0 mg/mL,而C组甲醇血浓度低于顶空气相色谱仪检测阈值;B组的甲酸血浓度为0.61mg/mL,C组甲酸浓度接近B组,为0.60mg/mL,与B组比较,C组脑和胃组织内的甲酸浓度有增加的趋势,而肝和肾组织中的甲酸浓度反而有下降趋势。③在视网膜和玻璃体混合物中,甲醇中毒组aB晶状体蛋白、ALDH2和ATP5A1的表达量较对照组有增加趋势,且C组的表达量的上调更明显。相对于对照组,B组视网膜组织内未检测到明显的αB晶状体蛋白表达量,ALDH2和ATP5A1的表达没有发现明显的改变;在C组,视网膜组织内的αB晶状体蛋白、ALDH2和ATP5A1的表达均呈现下调的现象。在玻璃体液内,B组αB晶状体蛋白的表达改变不是很明显,但C组αB晶状体蛋白发生上调;在中毒组玻璃体液内ALDH2和ATP5A1的表达均发生上调,且C组玻璃体液内的ALDH2和ATP5A1高表达现象较B组更为明显。结论:大鼠甲醇中毒后ERG损害明显,且中毒7天组的损害比3天组更为严重,可能与其代谢产物甲酸的蓄积作用有关。相较于视网膜,玻璃体液内αB晶状体蛋白、ALDH2和ATP5A1表达的变化更适宜作为甲醇中毒视网膜毒性的生物学标志。甲醇中毒后视网膜功能改变与甲酸的蓄积以及αB晶状体蛋白、ALDH2和ATP5A1表达变化之间可能存在潜在的关联,值得进一步探索。
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