目的胆管癌,从组织细胞学的角度来说,是起源于胆管上皮细胞的恶性肿瘤,包括肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)和肝外胆管癌(extrahepaticcholangiocarcinoma,ECC)。由于其解剖位置特殊,恶性程度高,且起病隐匿,故早期诊断率很低,确诊时往往已到中晚期,失去了根治性切除的机会,预后极差。其发病原因仍不明了。随着对胆管癌发病机制的不断深入,人们开始从基因水平探索致癌的机制,有人认为细胞凋亡和细胞周期调控失常在发病机制中起作用。热休克蛋白(heatshock protein,HSP)是一组生物体内普遍存在、进化上高度保守的蛋白质家族,又被称为分子伴侣(molecular chaperone),在应激状态下HSP70的含量会显著增加,并为细胞提供保护。肿瘤细胞内诱导表达的HSP70,一方面可能与多种原癌基因相互作用,调节细胞增殖;另一方面还参与了肿瘤细胞抑制凋亡过程。HSP70与许多肿瘤发生发展、生物学行为及其预后都有较密切关系,但其在胆管癌中的表达情况及临床意义尚无明确报道。凋亡细胞在激活的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)作用下降解。Caspase家族在肿瘤细胞死亡信息传递过程中起核心作用。Caspase-3是凋亡信号转导通路中的重要执行分子,其激活后导致细胞的不可逆性凋亡。大量研究表明HSP70作为“分子伴侣”,在Caspase凋亡途径中发挥着关键作用,可能参与调控肿瘤细胞凋亡。我们利用免疫组织化学方法检测HSP70和Caspase-3在胆管癌组织中的表达,并探讨二者的相关性及其临床意义。检测HSP70和Caspase-3蛋白在胆管癌组织中的表达,并探讨其相关性及其与临床病理特征的关系。研究胆管癌的发病机制,为防治该疾病提供依据。方法1、研究对象68例肝外胆管癌病理标本均取自中国医科大学附属盛京医院病理科(1996.01—2006.12)手术切除原发性肝外胆管癌标本。所有标本术前均未进行放化疗,并经病理确诊。其中男性35例,女性33例,年龄在45-70岁之间,平均62岁。高/中/低分化胆管癌分别是32/24/12例。淋巴结转移38例,未转移30例。按UICC分期标准进行分期,Ⅰ期14例,Ⅱ期18例,Ⅲ期28例,Ⅳ期8例。2、主要试剂鼠抗HSP70单克隆抗体(1:50)、兔抗人Caspase-3单克隆抗体(1:50)、SP试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。3、免疫组织化学染色(SP法)蜡块连续切片,厚度4um。选取一张进行常规HE染色,确定组织学诊断及分化程度。检测HSP70和Caspase-3在胆管癌组织中的表达,操作严格按试剂盒说明进行。DAB显色。采用S-P法对全部标本进行免疫组化染色,染色前用微波炉进行抗原修复。用已知阳性组织切片作为阳性对照,以PBS替代一抗作为阴性对照。4、结果判定阳性判断标准以出现黄色或棕黄色颗粒为阳性,随机观察100个细胞,HSP70的染色结果分为3级:阳性细胞数＜30%,染色颗粒黄、细、成堆为1级;阳性细胞数30%-60%,染色颗粒深黄、粗、成片为2级;细胞阳性数＞60%,染色颗粒棕黄、粗大、成片为3级。Caspase-3染色结果分5级:阳性细胞数＜1%为0级,1%-24%为1级,25%-49%为2级,50%-74%为3级,75%-100%为4级,设定0、1、2级为低表达,3级和4级为高表达。5、统计学分析应用SSPS 12.0统计软件进行数据处理。分别采用秩和检验、Pearson相关分析。P＜0.05为具有统计学意义。结果1、HSP70和Caspase-3蛋白在胆管癌中的表达HSP70和Caspase-3蛋白的阳性信号主要位于细胞质,少数细胞核阳性,胆管癌分化越差,HSP70表达越强(P＜0.05),胆管癌分化越差,Caspase-3表达越弱(P＜0.05)。2、HSP70和Caspase-3表达与胆管癌临床病理参数的关系,以及其之间的关系在胆管癌中HSP70的表达强度与胆管癌的分化程度明显正相关(r=0.251,p=0.039)。Caspase-3蛋白的表达强度与胆管癌的分化程度明显负相关(r=-0.310,p=0.01)。在胆管癌中HSP70和Caspase-3蛋白的表达与年龄,性别,淋巴结转移和TNM分期无关。HSP70蛋白的表达和Caspase-3蛋白的表达呈负相关(r=-0.412,p=0.000),且有统计学意义。结论1、在胆管癌中HSP70和Caspase-3蛋白的表达强度与胆管癌的分化程度有相关性。HSP70蛋白的表达强度与胆管癌的分化程度明显正相关;Caspase-3蛋白的表达强度与胆管癌的分化程度明显负相关。2、在胆管癌中HSP70和Caspase-3蛋白的表达与年龄,性别,淋巴结转移和TNM分期无关。3、在胆管癌中HSP70的表达与Caspase-3的表达具有明显负相关性。