γC家族的细胞因子是一组具有四个α-螺旋束结构的I型细胞因子,包括IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15以及IL-21,它们的共同特点是在它们的受体复合物中都含有一个共同的细胞因子受体γ链,这就使得它们在调节免疫应答和淋巴系统的体内平衡方面具有某些相似的生物学功能。虽然γC不能单独和细胞因子结合,并且它们主要通过非极性作用结合,其作用力很弱,但是γc却是γC家族细胞因子信号转导中必不可少的一个元件。研究表明细胞膜能够通过改变受体的聚集或构象,抑制或引发受体胞内域的磷酸化等来影响受体介导的信号传导过程。此外,蛋白质通常通过与其它蛋白质形成复合物来执行自己的功能,即某一个蛋白质的功能表型要通过与其它蛋白质之间的相互作用来实现。故为了更深入地理解γC在其介导的信号转导过程中的作用,我们有必要探讨γC胞内域（ICD）与细胞膜之间的相互作用以及确定在生理条件下能与γC互作的蛋白质。基于此,本论文主要的工作内容如下:1、利用分子克隆技术成功构建了 6His-SUMO-ICD载体同时在大肠杆菌中进行异源表达,虽然SUMO融合标签在一定程度上提高了目的蛋白的溶解度,但是效果不是很理想,而该融合标签对目标蛋白的功能和结构存在一定的影响,故后续需要利用SUMO蛋白酶移除6His-SUMO tag,综合考虑决定将人源γC胞内域基因通过5’NdeI和3’XhoI插入到pET-28a载体编码6His tag的序列的下游以形成6His-ICD重组载体。同样运用大肠杆菌原核表达系统对6His-ICD进行诱导表达,获得无生物活性的包涵体溶液,继而进行稀释复性、透析复性,最后利用FPLC进行进一步的纯化以获得高纯度且正确折叠的蛋白样品,为后续的实验作准备。2、在生理pH下,利用磷脂模拟细胞膜,通过液体核磁、圆二色谱、蛋白质的固有荧光说明γc胞内域能与酸性磷脂发生特异性结合并且这个过程是可逆的。利用体外定点突变技术成功构建了四种突变体如W310A、R285A+R289A、K294A、K315A并获得了高纯度且正确折叠的突变体蛋白,进一步的研究表明γC胞质域固有荧光的主要贡献者是W310,并且其中的R285+R289及K294对它与酸性磷脂的作用无明显的影响,而K315对二者的相互作用有较大的影响。这说明γc胞内域与酸性磷脂作用时不仅存在静电相互作用可能还存在其它的作用力如疏水相互作用。本课题组前期的动力学模拟数据表明γC胞质域近膜区E284-G316之间的残基在大多数模拟过程中与酸性磷脂具有强烈的相互作用,显然动力学模拟结果和实验结果相一致。3、利用甲醛交联将蛋白质复合物固定在细胞内并通过免疫共沉淀初步探索生理条件下γC与PRDX2能否发生相互作用。免疫印迹确定γC与PRDX2在共转染后的HEK293T细胞中均有表达,收集免疫共沉淀的复合物,煮沸变性后经SDS-PAGE凝胶电泳进行分离并通过免疫印迹逐一进行分析,结果我们在免疫共沉淀复合物中既检测到了 γC也检测到了 PRDX2,故我们初步认为二者在细胞中能够发生相互作用。后续课题组将进一步实验以排除假阳性,同时利用双分子荧光互补技术来进一步验证。