论文部分内容阅读
目的：采用基因芯片筛选二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)阻滞鼻咽癌CNE2细胞周期相关基因,初步探讨DADS阻滞CNE2细胞周期的分子机制。方法：采用MTT法检测DADS抑制CNE2细胞增殖的IC50值；细胞生长曲线分析DADS对CNE2细胞生长的抑制作用；流式细胞术检测DADS对CNE2细胞周期分布的影响；基因芯片检测DADS调节CNE2细胞周期相关基因；RT-PCR. Wester-blotting和免疫细胞化学验证差异基因和蛋白的表达。结果：(1)DADS抑制CNE2细胞增殖的IC50值为30 mg·L-1；随着DADS浓度增加,处理时间延长,对CNE2细胞抑制作用明显增加(n=3,P<0.05)。(2)DADS处理CNE2细胞后,Go／G1期细胞数明显增加,S期细胞数影响不大,而G2／M期细胞则减少,且随着DADS处理浓度的增加,其Go／G1期细胞数逐渐增加(n=3,P<0.05)。(3)基因芯片共检测出1074个差异表达基因,其中与细胞周期相关基因31个(上调基因20个,下调基因11个)。(4)RT-PCR、Western-blotting和免疫细胞化学染色结果证实PLK1和SASH1基因表达与基因芯片检测结果基本一致。结论：1、DADS抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖呈浓度和时间依赖性,可能与阻滞CNE2细胞于Go／G1期有关。2、DADS阻滞CNE2细胞于Go／G1期,可能与上调SASH1、CCNG2、DUSP1和CDKN2B等基因表达和下调PLK1、GTSE1、RCC1和ANAPC7等基因表达有关。