【摘 要】
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目的：观察清心安神方含药血清对豚鼠离体心室肌细胞动作电位(AP)及大鼠离体心室肌细胞内向整流钾电流(Ik1)的影响。
方法：(1)膜片钳技术中的钙耐受的心室肌细胞分离方
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目的：观察清心安神方含药血清对豚鼠离体心室肌细胞动作电位(AP)及大鼠离体心室肌细胞内向整流钾电流(Ik1)的影响。
方法：(1)膜片钳技术中的钙耐受的心室肌细胞分离方法：经过Langendorff灌流系统的改进,酶浓度的合理选择及配置,对温度、速度、时间、压力及pH值的严格控制,对分离心室肌细胞的进行梯浓度复钙；(2)清心安神方空白血清及含药血清的制备：清心安神经验方协定比例,采用传统方法煎煮,按人与大鼠的体表面积比,以2~4ml/200(g·次),2次/d,连续3天,实际灌胃剂量为其等效剂量的5倍进行换算后,浓缩到2.25g生药/毫升,末次给药后1h,麻醉后腹主动脉取血,室温下静置1h,3000rp/min离心20min分离血清。空白血清组以等体积生理盐水进行灌胃。含药血清和空白血清均用56℃水浴锅灭活30min,-20℃保存。(3)清心安神方含药血清对豚鼠离体心室肌细胞动作电位的影响：使用Langendorff灌流系统离体主动脉逆行灌流豚鼠心脏,联合使用胶原酶II和蛋白酶E,急性酶解法分离获得单个心室肌细胞。采用全细胞膜片钳技术电流钳模式记录动作电位,观察含20%浓度的空白血清及含药血清和含40%的空白血清及含药血清的细胞外液灌流对AP的影响。(4)清心安神方含药血清对大鼠心室肌细胞内向整流钾通道的影响：使用Langendorff灌流系统离体主动脉逆行灌流大鼠心脏,联合使用胶原酶II和蛋白酶E,急性酶解法分离获得单个心室肌细胞。采用全细胞膜片钳技术电压钳模式记录Ik1,观察含20%浓度的空白血清及含药血清和含40%的空白血清及含药血清的细胞外液灌流对Ik1电流的影响
结果：(1)清心安神方含药血清对豚鼠心室肌细胞动作电位的影响：20%含药血清组使动作电位复极至50%(APD50)和至90%(APD90)时动作电位时程延长(n=6 P<0.05)；40%含药血清组使动作电位复极至 50%(APD50)和至 90%(APD90)时动作电位时程延长(n=7 P<0.01)；(2)清心安神方含药血清对大鼠心室肌细胞内向整流钾电流的影响：以测试电压-100mV 条件下的稳态电流值作为观察指标,清心安神方含药血清对IKl内向电流成分影响为：20%含药血清组从(-36.17±17.05)pA/pF抑制为(-24.80±13.94)pA/pF(n=6 P<0.05),40%含药血清组从(-30.68±10.39)pA/pF抑制为(-21.03±3.47)pA/pF(n=7 P<0.05)。
结论：(1)20%及40%清心安神方含药血清均可引起豚鼠心室肌细胞APD50, APD90 延长,其中 40%含药血清组较为明显,呈浓度依赖性；(2)清心安神方含药血清对大鼠心室肌细胞 IKl内向成份有抑制作用,呈浓度依赖性。清心安神方对动作电位的延长,同时对内向整流钾电流的抑制,可能是清心安神方在临床上具有抗心律失常作用的药理机制。
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