莱菔硫烷对EAE小鼠脾组织中各辅助性T细胞亚型比例及相关炎性因子表达的影响及机制探讨

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目的:利用多发性硬化的经典动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)小鼠,研究莱菔硫烷对EAE小鼠脾组织中Th1、Th2、Th17细胞的比例及相关炎性因子表达水平的影响,初步探讨莱菔硫烷对EAE小鼠的免疫调节作用和可能的作用机制,以进一步深入挖掘多发性硬化的可能发病机制,为新的治疗方向和方法提供有意义的基础实验依据。方法:取54只8-10周龄、体重18-20克的C57BL/6雌性小鼠,随机分为三组:正常对照组、EAE组及莱菔硫烷组,每组小鼠各18只。利用MOG35-55合成多肽作为抗原,辅以完全弗氏佐剂、百日咳毒素及结核菌素,对EAE组和莱菔硫烷组小鼠进行免疫以建立EAE的动物模型。免疫当天记为第0天。自免疫第1天开始,莱菔硫烷组小鼠给予莱菔硫烷溶液50mg/kg隔日腹腔注射,正常对照组和EAE组小鼠给予等体积生理盐水隔日腹腔注射,并且每日两次观察各组小鼠的体重变化和发病情况,并进行临床神经功能评分。于发病高峰期在各组发病小鼠中随机选取各6只处死。无菌条件下取出处死小鼠的脾进行实验。利用流式细胞学的方法检测小鼠脾组织中Th1、Th2和Th17细胞的比例;利用酶联免疫吸附测定法(双抗体夹心法)测定小鼠脾细胞培养液上清液中IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12及IL-17A的表达水平。结果:1各组小鼠临床表现:正常对照组小鼠无发病;莱菔硫烷组小鼠与EAE组小鼠相比,其发病率、体重减轻程度及发病高峰期(免疫第20天)的临床神经功能评分均明显降低(P<0.05)。2各组小鼠脾组织中Th1、Th2和Th17细胞比例的比较:于发病高峰期,莱菔硫烷组、EAE组及正常对照组比较,Th17细胞比例有明显差异,EAE组Th17细胞比例较正常对照组明显升高(P<0.05),莱菔硫烷组Th17细胞比例较EAE组明显降低(P<0.05);各组小鼠脾组织中Th1和Th2细胞所占的比例无明显统计学差异。3各组小鼠脾细胞培养液上清液中IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12及IL-17A浓度的比较:于发病高峰期,莱菔硫烷组、EAE组及正常对照组相比较,IL-6、IL-10和IL-17A浓度有明显差异,EAE组小鼠脾细胞培养液上清液中IL-6和IL-17A的浓度较正常对照组明显升高(P<0.05),莱菔硫烷组小鼠脾细胞培养液上清液中IL-6和IL-17A的浓度较EAE组明显降低(P<0.05),IL-10的浓度较EAE组明显升高(P<0.05);各组小鼠脾细胞培养液上清液中IFN-γ、IL-4及IL-12的浓度无明显统计学差异。结论:1莱菔硫烷能够降低EAE小鼠的发病率,推迟小鼠的发病时间,降低小鼠神经功能缺损程度。2莱菔硫烷能够通过增加IL-10的表达、减少IL-6及IL-17A的生成及抑制Th17形成等多方面影响对EAE小鼠起到积极的免疫调节作用,上述作用很可能是通过激活Nrf2/ARE通路实现的。
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