目的：糖尿病心肌细胞凋亡是糖尿病心肌病最重要的病理变化之一，促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)链是真核生物信号传递网络中的重要途径之一，是一类广泛存在于真核细胞中的丝/苏氨酸蛋白激酶。它是缺血、缺氧、激素作用、生长因子及细胞因子等各种细胞外刺激诱导基因表达、细胞增殖等核反应的共同通路或汇聚点，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用。本实验利用原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，研究高糖对心肌细胞凋亡的影响及分子通路机制和MAPK通路阻断剂的抗心肌细胞凋亡作用，旨在探索糖尿病性心肌病药物防治的新靶点。方法：1心肌细胞的培养：无菌条件下取新生1-3天的Sprague-Dawley（SD）大鼠乳鼠，取心尖，剪碎成约1mm3大小，应用0.1%的胰酶、0.04%的胶原酶Ⅱ的混合酶消化液分离心肌细胞，10%胎牛血清中和终止消化，应用差速贴壁法获取心肌细胞，置于37℃、5%CO2的培养箱培养，培养基中加入Brdu抑制成纤维细胞生长，每48小时更换培养基。倒置相差显微镜观察心肌细胞形态，0.4%台盼蓝染色检查心肌细胞成活率，免疫细胞化学染色鉴定心肌细胞纯度。2分组：将培养的乳鼠心肌细胞随机分为7组：对照组，葡萄糖浓度为5.5mmol/L；高糖组，葡萄糖浓度为25mmol/L；高渗对照组:对照组+19.5mmol/L的D-甘露醇；DMSO组：高糖组+1μl/ml的DMSO预处理30分钟； SB203580组：高糖组+P38抑制剂SB203580预处理细胞30分钟； PD98059组:高糖组+ERK抑制剂PD98059预处理细胞30分钟；SP600125组:高糖组+JNK抑制剂SP600125预处理细胞30分钟;3检测指标：干预72h后，应用流式细胞术分析各组细胞凋亡率，Western blot检测凋亡指标caspase-3蛋白的表达变化及p-JNK，p-P38蛋白表达的变化。4数据分析：所得数据采用均数±标准差（x±s）表示，统计分析运用SPSS13.0软件。采用单因素方差分析及q检验进行组间的两两比较。以P<0.05作为差异有统计学意义。以P<0.01作为差异有显著统计学意义。结果:1应用混合酶多次消化法，差速贴壁，成功地培养出纯度较高的心肌细胞，α-平滑肌肌动蛋白免疫细胞化学鉴定为阳性。2流式细胞仪结果：与对照组相比，高渗组凋亡率无明显变化（P＞0.05）;高糖组的细胞凋亡明显增多，有统计学意义（P <0.01）；PD98059组及DMSO组较高糖组细胞凋亡无明显变化（P＞0.05），SP600125组及SB203580组较高糖组细胞凋亡均减少（p<0.01）。3Caspase-3表达结果：与对照组相比，高渗组的caspase-3表达无明显变化（P＞0.05），而高糖组Caspase-3表达增多（P <0.01）；与高糖组相比，PD98059组细胞caspase-3表达无明显变化（P＞0.05），SP600125及SB203580组caspase-3表达均减少（P <0.01）。4JNK表达结果：与对照组相比，高渗组p-JNK表达无明显变化（P＞0.05），高糖组p-JNK明显表达增多（P <0.01）；SP600125组较高糖组p-JNK表达明显较少（P <0.01）；5P38表达结果：与对照组相比，高渗组p-P38表达无明显变化（P＞0.05），高糖组p-P38表达明显增多（P<0.01），SB203580组p-P38较高糖组表达明显减少（P <0.01）。结论:125mmol/L的高糖可能通过激活casepase-3诱导了心肌细胞的凋亡；2高糖可能通过激活P38及JNK途径，激活caspase-3从而诱导心肌细胞凋亡；3P38及JNK通路抑制剂在糖尿病心肌病中有抑制心肌细胞凋亡的作用。