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目的：自从抗CD20单克隆抗体——利妥昔单抗（Rituximab）应用于CD20+B细胞淋巴瘤治疗以来，其单药或与传统化疗药物联合应用，疗效上有了很大提高，能显著提高患者的完全缓解率(CR)、总有效率（OER）和总生存率（OS），但仍有近半数患者复发或难治。对利妥昔单抗耐药淋巴瘤采取何种治疗手段，已成为临床上迫切需要解决的问题。组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）是一类新型抗肿瘤药物，通过抑制组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的活性，诱导靶细胞中组蛋白高度乙酰化，改变组蛋白与DNA链间的结合状态，启动某些特异性基因表达，体外试验已证实它对多种肿瘤细胞，包括膀胱癌、胃癌等实体瘤，以及血液系统恶性肿瘤，如淋巴瘤等，均有抑制增殖、诱导再分化和促进凋亡作用。但目前对利妥昔单抗耐药淋巴瘤细胞株是否有作用以及相关机制，国内外尚无相关文献报道。本实验旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂——LBH589在利妥昔单抗耐药的人Burkitt淋巴瘤细胞株（RRCL）的作用及其可能的机制。方法：1肿瘤细胞的传代培养：将人Burkitt淋巴瘤细胞株Raji和RRCL用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基培养，置于37℃、5%CO2、饱和湿度条件下定期换液传代,取对数生长期细胞用于实验。2MTT法：通过酶联仪测量Raji细胞及RRCL的分光光度值(OD值)，检测LBH589对两种肿瘤细胞的作用：取对数生长期Raji细胞和RRCL接种于96孔板，利用DMSO溶解LBH589，经预实验筛选有效浓度后，调整LBH589的终浓度分别为10nM、500nM、5000nM、10000nM、25000nM，设为5个实验组，分别加入96孔板，每浓度5个复孔，常规设相应DMSO含量的阴性对照组及加培基实验对照组，培养24、48、72小时后，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定OD值，计算抑制率。3选取10nM、500nM、5000nM三个浓度作为处理浓度，利用流式细胞仪检测凋亡率、细胞周期及其相关蛋白Bcl-2、Fas的表达水平变化。4经预实验筛选有效浓度后，调整LBH589终浓度分别为0.5nM、1nM、2nM，处理两种细胞24-48小时，流式细胞术检测CD20蛋白表达情况。结果：1MTT法检测LBH589对Raji细胞和RRCL的影响Raji细胞及RRCL经不同浓度(10nM、500nM、5000nM、10000nM、25000nM)LBH589作用24h-72h后，MTT法检测其OD值均有不同程度减低，抑制率逐渐增高。不同浓度LBH589处理相同时间，两种细胞株的抑制率均逐渐增高；相同浓度、不同处理时间，在一定时间范围内，随其逐渐延长，Raji细胞和RRCL的抑制率也呈不同程度增高。LBH589对两种细胞株均有抗增殖活性。析因设计资料的方差分析显示：对于Raji细胞，时间与浓度单因素对抑制率有影响，时间和浓度无交互作用；对于RRCL，时间与浓度单因素对抑制率有影响，且时间和浓度存在交互作用。两因素S-N-K法多重比较显示：对于Raji细胞，在LBH589的5个处理浓度组中，除500nM与5000nM、5000nM与10000nM外，其余任两组间比较均有统计学差异（P<0.05），在3个不同处理时间组中，只有24h与72h组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。对于RRCL，在不同浓度组及时间组中，任两组组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。相同药物浓度、相同处理时间，RRCL抑制率均高于Raji细胞的抑制率，差异有统计学意义（P<0.05）。提示，LBH589对RRCL的抑制作用更强。2流式细胞学检测LBH589对两种肿瘤细胞凋亡、细胞周期、Bcl-2、Fas及CD20蛋白表达水平的影响2.1随LBH589浓度(10nM、500nM、5000nM)的增加，Raji细胞及RRCL细胞凋亡峰值增加，细胞凋亡率增高，空白对照组与各实验组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。2.2不同浓度(10nM、500nM、5000nM)LBH589处理Raji细胞及RRCL24小时后，G0/G1期细胞比例随药物浓度增加逐渐增加，同时S期及G2/M期细胞比例逐渐减少。提示，LBH589阻滞细胞周期于G0/G1期。2.3经过不同浓度(10nM、500nM、5000nM)LBH589作用18h后，两种细胞Bcl-2蛋白荧光均道值逐渐减低，提示LBH589诱导细胞凋亡可能与Bcl-2蛋白表达下调有关。LBH589分别处理两种肿瘤细胞6、24、48小时后，在各时间组内，Raji细胞Fas蛋白荧光均道值逐渐增高，在48h变化最显著，对照组与实验组比较差异有统计学意义（P<0.05）；但对于RRCL，Fas蛋白荧光均道值变化无规律性，提示LBH589诱导Raji细胞凋亡可能也与Fas蛋白表达上调有关，诱导RRCL凋亡与Fas蛋白表达水平无关。2.4低浓度(0.5nM、1nM、2nM)LBH589作用24、48h后，在各时间组内，两种肿瘤细胞CD20蛋白荧光均道值均逐渐增高，对照组与实验组及实验组组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：1LBH589体外具有抑制Raji细胞和RRCL增殖的作用，此抗增殖作用与LBH589浓度及处理时间呈正相关。对于RRCL，具有明显的时间-剂量-效应依赖关系；2LBH589可诱导Raji细胞和RRCL凋亡，阻滞细胞周期于G0/G1期；3LBH589诱导Raji细胞凋亡的机制可能与Bcl-2蛋白表达下调和Fas蛋白表达上调有关；诱导RRCL凋亡的机制可能与Bcl-2蛋白下调有关；4LBH589对RRCL的抑制作用更强；5低剂量LBH589可诱导CD20+B细胞淋巴瘤细胞株CD20蛋白表达上调，可能在克服利妥昔单抗耐药方面发挥一定作用。