论文部分内容阅读
本文对药用植物使君子(Quisqualis indica L.)的内生真菌进行了种群多样性调查分析,并在此基础上以松材线虫[Bursaphelenchus xylophilus(Steiner&Buhrer)Niclde]为测试的靶标生物,从所分离获得的内生真菌中筛选出具有杀线虫活性的菌株;并对活性菌株的培养条件进行了优化研究。
以PDA、PCA、PSM、Czapek和使君子煎汁培养基为分离用培养基,从采自广东省农业技术推广中心、海印桥南盆栽场、华南植物园、芳村花卉博览园等地的使君子根、茎、叶组织中共分离获得249株内生真菌。根据形态特征和ITS序列分析鉴定出其中的222株,分属于4纲、7目、15科、23属,其中链格孢属(Alternaria)3株、曲霉属(Aspergillus)2株、葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)3株、刺孢壳属(Chaetomella)1株、毛壳菌属(Chaetomium)11株、炭疽菌属(Colletotrichum)109株、垫壳孢属(Coniella)3株、Eutypella 5株、镰孢属(Fusarium)5株、小丛壳属(Glomerella)3株、球座菌属(Guignardia)30株、Nemania 1株、多节孢属(Nodulisporium)l株、拟青霉属(Paecilomyces)2株、Paraphaeosphaeria 2株、青霉属(Penicillium)2株、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)2株、茎点霉属(Phoma)6株、拟茎点霉属(Phomopsis)21株、棘壳孢属(Pyrenochaeta)1株、木霉属(Trichoderma)3株、炭角菌属(Xylaria)3株、Zopfiella 3株。在属的分类水平上以炭疽菌属(Colletotrichum)、球座菌属(Guignardia)、拟茎点霉属(Photoopsis)为优势种群,分离频率分别为43.78%、12.05%和8.43%。试验表明,不同采集地使君子内生真菌的数量及种群组成存在一定差异,但优势种群大体相同,主要是炭疽菌属(Colletotrichum)、球座菌属(Guignardia)和拟茎点霉属(Phomopsis)。使君子不同部位的内生真菌数量及种群组成差异则较大,表现出明显的组织特异性,从叶组织中分离到的内生真菌占总菌株的69.48%,大于从根、茎组织中分离株数的总和;葡萄座腔菌属(Botryosphaeria)、球座菌属(Guignardia)、Nemania、多节孢属(Nodulisporium)、拟青霉属(Paecilomyces)、Paraphaeosphaeria、拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)、炭角菌属(Xylaria)以及Zopfiella是叶片组织的特有种群;刺孢壳属(Chaetomella)、垫壳孢属(Coniella)、Eutypella以及青霉属(Penicillium)是茎组织的特有种群;棘壳孢属(Pyrenochaeta)是根组织中的特有种群。不同培养基上分离获得的内生真菌种群也存在差异,刺孢壳属(Chaetomella)仅在PDA上分离到;Nemania、棘壳孢属(Pyrenochaeta)仅在PCA上分离到;拟青霉属(Paecilomyces)仅在PSM上分离到;Zopfiella仅在Czapek培养基中分离到;多节孢属(Nadulisporium和青霉属(Penicillium)仅在使君子煎汁培养基上分离到。上述分离获得的249株内生真菌发酵培养滤液对松材线虫的生物活性测定结果表明,10个菌株对松材线虫有较强活性,其中菌株FDYS-1活性明显,致死率达99%;热稳定性较好,121℃处理20min仍不失活;且产生活性物质的能力基本保持遗传稳定,连续继代6代后致死率仍达90.43%,是具有较好开发应用前景的杀线活性菌株。单因子试验和正交试验结果表明,在PD培养液、初始pH5~8、150rpm、装液量100mL(250mL三角瓶)、接种7块菌饼(d=5mm)的条件下培养3d,FDYS-1生长最好,滤液杀线虫活性最强,稀释3倍后对松材线虫的校正死亡率仍高达96.45%。正交试验极差分析表明:培养时间是影响菌株培养滤液杀线活性的关键性因子。