犬腹泻是由多病原、多因素引起的以犬排便次数增加,粪便中水分增多为特征的一种临床疾病,严重危害犬的健康。如何防控犬腹泻已经成为兽医临床需要迫切解决的问题。中药因其天然性、低残留性和耐药性被广泛的应用于临床,是抗生素的良好替代品;益生菌是一类对宿主有益的活性微生物,常被用来治疗与胃肠道相关的疾病。但有关犬源益生菌与中药联合应用未见相关报道。为此,本研究通过对犬粪便中的益生菌进行分离、鉴定、筛选,并与马齿苋联合在临床上进行应用,为预防犬腹泻提供试验依据。本研究从健康犬粪便中分离益生菌;通过形态学观察和分子生物学方法鉴定分离的益生菌;筛选具有耐酸耐胆盐、对致病性大肠杆菌有抑制作用且马齿苋水提液对其无抑制作用的益生菌;采用单因素试验和正交试验确定益生菌与马齿苋的最佳联合应用条件;以番泻叶导致的犬腹泻模型为研究对象,观察益生菌与马齿苋联合应用对犬腹泻的防治效果。结果:从健康犬粪便中分离出8株益生菌;通过形态学观察发现3株芽孢杆菌在LB固体培养基中形成圆形或椭圆形、凸起或凹陷、乳白色、边缘光滑或粗糙的菌落,5株乳酸菌在MRS固体培养基中形成圆形、凸起、乳白色、边缘光滑的菌落;分子生物学方法鉴定结果为:1株枯草芽孢杆菌(DY001)、1株贝莱斯芽孢杆菌(DY002)、1株地衣芽孢杆菌(DY003)、2株粪肠球菌(DR001和DR005)、1株海氏肠球菌(DR002)、1株乳酸肠球菌(DR003)、1株罗伊氏乳杆菌(DR004);耐酸耐胆盐结果显示2株芽孢杆菌(DY002、DY003)、2株乳酸菌(DR003、DR004)表现了较强的耐酸耐胆盐特性;对致病性大肠杆菌抑制结果显示3株乳酸菌(DR001、DR003、DR004)对大肠杆菌有抑制作用;因此,选择罗伊氏乳杆菌(DR004)为联合应用菌株;马齿苋的体外抑菌试验结果显示,马齿苋水提液对8株益生菌无抑制作用,但对大肠杆菌有抑制作用;单因素试验结果表明:最适宜发酵时间36 h,马齿苋添加量25 g,接种量为20%;L9(33)正交试验得出最佳联合条件为:发酵时间36 h,马齿苋添加量20 g,接种量20%,联合应用后马齿苋多糖含量达到最大值0.066±0.02 mg/mL,活菌数最高为6.84×107cfu/mL;通过动物试验发现益生菌与马齿苋联合应用对犬腹泻的防治效果优于单独使用益生菌或马齿苋。结论:从健康犬粪便中分离出的益生菌与马齿苋联用,可以提高马齿苋多糖含量和益生菌活菌数,对番泻叶导致的犬腹泻具有一定的防治作用。