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原发性肝癌(HCC)恶性程度高,具有快速生长和极强的侵袭与远端转移能力。肝癌的发生、发展和转移是一个多因素多步骤的复杂过程,其中肝癌细胞的异常凋亡、血管生成在肝癌发生发展、复发和转移过程中起重要作用。尽管针对早期肝癌患者可以通过手术、化疗等手段使得患者的生存率提高,但是目前针对晚期及术后发病患者仍然缺乏有效的治疗手段。随着分子生物学的发展,对凋亡相关蛋白及血管生成因子的研究日益成为了肝癌治疗的热点。索拉非尼作为一种多激酶抑制剂,具有双重抗肿瘤作用。索拉非尼对野生型和突变型B-Raf有强效的抑制作用,通过抑制Raf/MEK/ERK(MAPK)途径中丝氨酸／苏氨酸激酶的活性,抑制肿瘤细胞的增殖,其次索拉非尼还能通过抑制受体酪氨酸激酶相关的细胞膜受体,如血管内皮生长因子受体(VERGF)和血小板衍生生长因子受体(PDGFR)等的活性而达到阻断肿瘤新生血管的形成,从而发挥抗肿瘤的作用。研究目的：本研究以体外培养的人肝癌BEL-7402和HepG-2细胞为研究模型,通过体外实验研究洋地黄毒苷单药与联合不同浓度索拉非尼对这两种细胞增殖的影响,本研究旨在探讨洋地黄毒苷与索拉非尼联用对HCC的联合抑制作用及其相关机制,为肝癌的综合治疗提供重要参考价值。研究方法：1、用MTT法检测药物作用于人肝癌BEL-7402和HepG-224h、48h和72h细胞的增殖,根据OD值计算细胞增殖抑制率。利用q值判断洋地黄毒苷联合索拉非尼药物的协同作用；2、通过流式细胞术检测药物作用于人肝癌BEL-7402和HepG-2细胞后细胞周期分布；3、利用划痕愈合实验来检测洋地黄毒苷联合索拉非尼对人肝癌BEL-7402和HepG-2细胞迁移能力的影响；4、用Western Blot方法检测人肝癌BEL-7402和HepG-2细胞内ERK.p-ERK、 HIF-lα、HIF-2α和VEGF蛋白表达,以β-actin作为内参,对蛋白进行相对定量分析。实验结果：MTT检测细胞增殖结果表明洋地黄毒苷和索拉非尼在体外均能抑制人肝癌BEL-7402和HepG-2细胞的增殖,呈浓度、时间依赖性(P<0.05)。在联合药物组(digitoxn:10nmol/L, sorafenib:8μmol/L)作用于BEL-7402和HepG-2细胞48h后表现出协同作用。AO/EB染色后细胞形态学观察可见联合药物组表现出细胞凋亡的形态特征。流式细胞仪检测细胞周期显示,与对照组相比,洋地黄毒苷单药与联合用药均能使细胞周期阻滞于S期,而且联合用药组S期阻滞率明显高于单药组。Western-blot结果显示,单药组及联合用药组对BEL-7402和HepG-2细胞内ERK总蛋白的表达无显著性差异(P>0.05),而细胞内p-ERK、HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白的表达降低,与单药组相比,联合用药组具有显著性差异并呈时间依赖性(P<0.05)。实验结论：洋地黄毒苷与索拉非尼单药在体外均能抑制人肝癌BEL-7402和HepG-2细胞的增殖,在一定范围内呈时间与浓度依赖性。联合药物组(digitoxin:10nmol/L, sorafenib:8μmol/L)作用于BEL-7402和HepG-2细胞后表现出药物协同效应。各药物组均能诱导细胞凋亡,抑制细胞迁移和使细胞周期阻滞于S期。单药组或联合用药组都能下调细胞内p-ERK、HIF-1α、HIF-2α和VEGF蛋白的表达,发挥抑制肿瘤细胞增殖的作用。