止痢草油缓解断奶仔猪肠道氧化应激的作用及机制

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现代养猪生产中“早期断奶综合征”的发生,给养猪业造成巨大的经济损失。近年来的研究表明,早期断奶过程中仔猪抗氧化能力降低、自由基增多,在体内形成了氧化应激,被认为可能是导致“早期断奶综合征”的重要原因。在断奶应激时,仔猪肠道形态结构和功能均发生显著改变。因此,我们提出的研究假设是:仔猪早期断奶时,体内特别是肠道发生了显著的氧化应激,是造成肠道结构和功能受损的重要原因。而植物提取物止痢草油不仅具有抗菌性而且具有抗氧化特性,可以利用止痢草油减轻肠道氧化应激,从而保护肠道的结构和功能,调控早期断奶综合征的发生。本研究由三部分试验构成。首先以敌草快(Diquat)为应激源构建大鼠氧化应激模型,确认了Diquat诱导的大鼠氧化应激模型用于肠道氧化损伤研究的可行性;随后利用此模型评研究止痢草油对氧化应激大鼠肠道抗氧化酶活性、促炎性因子、上皮形态及紧密连接的影响,揭示止痢草油缓解大鼠肠道氧化损伤的机制;最后组织了2次试验,研究了早期断奶过程中止痢草油对仔猪肠道抗氧化酶活性、促炎性因子、肠道通透性、上皮形态和紧密连接的影响,以及在保育各阶段不同添加水平的效果,阐释了仔猪早期断奶过程中止痢草油缓解肠道氧化损伤的机制,确定了仔猪保育期各阶段止痢草油的适宜添加水平。主要结果如下:1、Diquat诱导的大鼠应激模型用于研究肠道氧化损伤的可行性对7周龄健康雌性Wistar大鼠腹腔注射0.1mnol/kg.bw的Diquat,成功诱导了氧化应激。与对照组大鼠相比,注射Diquat后大鼠血浆皮质醇水平显著升高(P<0.05),血浆、肝脏中脂质过氧化产物MDA含量极显著升高(P<0.01),而抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性极显著降低(P<0.01)。同时,注射Diquat的大鼠空肠MDA含量极显著升高(P<0.01),SOD和GSH-Px酶活性显著降低(P<0.01),空肠上皮绒毛发生萎缩甚至,表明肠道中发生了氧化损伤。这些结果表明:Diquat诱导的大鼠应激模型可以用于研究肠道的氧化损伤。2、止痢草油对大鼠肠道氧化损伤的干预作用及机理研究利用Diquat诱导的大鼠应激模型,评价了止痢草油对大鼠氧化损伤的干预作用。结果表明:与仅注射Diquat的负对照组大鼠相比,灌服止痢草油对试验组大鼠的影响是:显著提高了空肠SOD酶(P<0.05),极显著提高了GSH-Px酶(P<0.01)的活性,同时极显著降低了空肠MDA含量(P<0.01);另外,还显著提高了空肠食糜中乳酸杆菌数量(P<0.05),但显著抑制了产ROS的大肠杆菌的数量(P<0.05)。止痢草油处理还显著下调了空肠黏膜中促炎性因子TNF-a和IL-6的表达(P<0.05),上调了紧密连接咬合蛋白Occludin的基因和蛋白表达水平(P<0.05)。在高剂量灌服止痢草油时,显著降低了血浆皮质醇水平和食糜中氧自由基ROS含量(P<0.05)。与负对照组相比,止痢草油处理组大鼠空肠的绒毛高度以及绒腺比显著增加(P<0.05),形态结构更完整。这些结果显示,止痢草油通过抗菌和抑制粘膜炎症反应,从而控制了肠道自由基的过度产生,能够有效缓解肠道的氧化应激,对大鼠肠道氧化损伤具有良好的干预作用。3、止痢草油对断奶仔猪肠道氧化应激的干预作用机制及对生性能的影响组织了2次试验,来研究止痢草油对断奶仔猪肠道氧化应激的干预作用机制及对仔猪生性能的影响。试验一选择21d断奶的杜x长大健康断奶仔猪120头,随机分为2组,每组6重复栏,每栏10头。对照组饲喂基础日粮,试验组日粮是在基础日粮添加了500g/t止痢草油。在断奶当天随机选取6头仔猪;断奶后第7天,分别从对照组和试验组每栏随机抽取1头共12头仔猪,进行采血及屠宰取样。试验二中选择120头遗传背景相似,断奶体重接近的断奶仔猪,随机分为4组,每组5重复,每重复1栏,每栏6头。分别给予基础日粮、基础日粮+止痢草油产品250g/t、基础日粮+止痢草油产品500g/t、基础日粮+止痢草油产品750g/t的日粮处理。做好保育各阶段称重、耗料记录,并观察记录排粪情况,计算各阶段生产性能和腹泻指标。结果显示:1)与21d仔猪相比,断奶导致仔猪血浆皮质醇(P<0.05)以及空肠组织中ROS和MDA含量显著升高(P<0.05),而SOD和GSH-Px酶的活性极显著降低(P<0.01)。另外,大量产生ROS的肠道粪肠球菌和大肠杆菌数量显著升高(P<0.01),但乳酸杆菌数量显著降低(P<0.01)。空肠粘膜中促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表达均显著上调(P<0.01);紧密连接蛋白—咬合蛋白Occludin和闭锁蛋白ZO-1的表达下调(P<0.01)。肠道通透性指标血浆DAO活性(P<0.01)、血浆D-乳酸含量(P<0.05)升高,肠道上皮形态受到到损伤,绒毛高度降低(P<0.01),隐窝深度和绒毛宽度增加(P<0.05)。表明断奶导致仔猪肠道发生了显著的氧化应激。2)与对照组相比,添加止痢草油的仔猪断奶1周时,血浆皮质醇水平(P<0.05)和空肠MDA含量(P<0.05)显著降低,SOD酶的活性显著提高(P<0.05);肠道中粪肠球菌(P<0.01)、大肠杆菌数量显著降低(P<0.05),而对乳酸杆菌没有影响。饲料中添加止痢草油对断奶仔猪空肠粘膜中TNF-α的mRNA表达有下调趋势(P=0.0917),但对IL-1p、IL-6无影响(P>0.05);添加止痢草油显著降低了血浆中DAO活性(P<0.01)和D-乳酸含量(P<0.05),但对肠绒毛形态和紧密连接中Occludin、ZO-1的表达没有影响。3)先后进行了两次动物试验,在试验一中发现,在断奶后0-14d,日粮中添加500g/t的止痢草油产品,可以极显著降低腹泻率(P<0.01),对腹泻指数也有改善趋势(P=0.085),但对采食量、日增重、料肉比影响不显著(P>0.05);在试验二中发现,在断奶后0-24天,添加止痢草油产品对腹泻率、腹泻指数改善不明显(P>0.05),对料肉比的影响也不显著(P>0.05);添加250g/t、750g/t止痢草油产品对采食量、日增重提高不明显(P>0.05),添加量为500g/t时显著提高采食量(P<0.01)和日增重(P<0.05)。综上所述,本研究的结论是:(1) Diquat诱导的大鼠氧化应激模型,能够对肠道造成损伤,可以用于肠道氧化损伤研究。(2) Diquat诱导的大鼠氧化应激,导致肠道活性氧增加、抗氧化能力降低、炎症反应加重、紧密连接遭到破坏,肠道上皮绒毛损伤,而止痢草油的添加可以缓解上述问题。(3)早期断奶导致了肠道氧化应激的发生,造成了肠道氧化损伤,日粮中添加止痢草油产品可有效缓解上述问题,在仔猪保育期(断奶后0-24天),止痢草油产品的适宜添加水平是250g/t~500g/t。
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