~(99)Tc~m标记的ND1重组单链抗体在荷人结肠癌裸鼠体内分布及放射免疫显像研究

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目的 探讨99Tcm标记的ND1重组单链抗体(single-chain fragment variable,scFv)在荷人结肠癌裸鼠模型体内的分布及放射免疫显像。 方法 1.ND1重组scFv的制备和纯化 ND1重组scFv由中国医科大学细胞生物教研室研制。经鉴定为IgG1,ELISA检测免疫活性,证明其对结肠癌有较高的亲和性。测抗体浓度为1.5mg/ml,备用。 2.荷人结肠癌裸鼠模型的建立 纯系BALB/c 4~6周龄雌性裸鼠18只,平均体重为20~30g。将人体大肠癌细胞系CCL-187 1×107接种于背部皮下,饲养于SPF级动物房,待4周后,肿瘤直径长至0.5~1.0cm时用于实验。 3.抗体的标记及标记率的测定 抗体采用99Tcm预亚锡直接标记法标记,用纸层析法测定标记率。 4.标记抗体在荷人结肠癌裸鼠体内的分布 将荷人结肠癌裸鼠18只随机分为2组,其中一组裸鼠再分为3组,每组3只,腹腔注射99Tcm-ND1重组scFv 1850KBq,使用SPECT仪,配以低能平行孔高分辨准直器,采集计数为200K。分别于抗体注射后1h、3h、8h进行放射免疫显像。于每一时相显像后立即断颈处死动物,取眼球后血、肝、脾、胃、大肠、后大腿骨骼、肌肉、肺、心脏及肿瘤组织,用γ放免计数仪测定放射性计数,计算T/NT值。 另一组荷人结肠癌裸鼠9只分为3组,每组3只,尾静脉注人”To”-NDI重组S。Fv 1850KBq,抗体注射后lh、3h、sh每一时相立即断颈处死动物,取肿瘤组织及大肠,用Y放免计数仪测定放射性计数,计算T/NT值。 5.统计学处理 数据以Zn表示,并行t检验。 结 果 1.标记率的测定: 纸层析测标记率为 72%。 2.经腹腔注射后lh 月瘤/血比值为2.62。二.23,3h为3.90S3.25,sh为0.58。0.17。腹腔和尾静脉注射组大肠T/ NT值差异有显著性u<0.05和 P<0.005人 NDI重组 S*V在荷瘤裸鼠体内分布检测结果示腹腔注人后3h各脏器T/NT比值较高。 3.放射兔疫显像 腹腔注射一To”-NDI重组 SCFV后 sh内,9块肿瘤组织都获得良好的显像。荷瘤部位有较高的放射性浓聚,肿瘤显像清晰,显像阳性率达100%。与裸鼠肿瘤部位相符合,以3h显像最清晰。 结 论 ”To“-NDI重组SCFv对结肠癌具有良好的亲和力,可望作为结肠癌诊断、预后判定的导向载体。并为临床早期特异性诊断结肠肿瘤提供新的有效手段。
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