细胞因子是由免疫细胞和非免疫细胞产生的一类具有广泛生物学活性的异质性肽类调节因子,在体内能激活免疫活性细胞,对免疫应答的产生和调节有重要作用。IL-2、IL-4和IFN-γ,具有调节细胞和体液免疫、抵抗微生物感染、抗肿瘤等多种生物学功能,对调节和增强机体的免疫反应有重要作用。本研究分别成功的构建了山羊和猪的三种细胞因子的真核和原核重组质粒,研究了山羊三种细胞因子对口蹄疫灭活苗的免疫增强作用。为以后筛选高效的细胞因子免疫佐剂奠定基础。1.猪IL-4和IFN-γ的基因克隆依据NCBI上猪IL-4的GenBank NM₂14123.1登录号,猪IFN-yGenBankNM213948.1登录号,设计合成特异性引物,从刀豆素（ConA）刺激的猪外周血淋巴细胞（PBMC）,应用RT-PCR技术扩增出猪IL-4和IFN-γ基因序列,并采用软件进行生物信息学分析。克隆得到的猪IL-4成熟序列321bp,编码107个氨基酸；猪IFN-γ基因成熟序列432bp编码144个氨基酸与已公布的序列同源性分别为99.5%和100%。2.猪三种细胞因子重组蛋白的表达及活性检测构建了猪三种细胞因子的原核表达载体,并成功的表达了重组蛋白。pET328a（+）-SIL-2的融合蛋白大小为21.4 KD,pET32a（+）-SIL-4融合蛋白为30.3KD, pET28a（+）-SIFN-y融合蛋白为18.4 KD。采用亲和层析的方法对包涵体进行纯化,同时应用梯度透析复性的方式对纯化后的蛋白复性,获得了高纯度的重组蛋白。采用MTT法检测结果显示重组蛋白对猪外周血淋巴细胞的增殖作用的最佳浓度分别为 4 μg/mL、8μg/mL。在 PK-15/VSV系统检测 IFN-γ的抗病毒活性,结果显示在PK-15细胞上抑制VSV病毒复制的活性为2.70×103U/mg。3.真核表达系统的构建通过将山羊和猪的IL-2、IL-4、IFN-y基因分别与真核表达载体pVAX1.0连接,成功获得重组质粒。将重组质粒免疫小鼠,采用RT-PCR和westen-blot法可以检测到重组真核表达载体在小鼠体内成功转录和表达。4山羊细胞因子的免疫增强作用的研究将山羊的三种重组细胞因子作为免疫佐剂与口蹄疫疫苗同时免疫山羊,免疫后山羊检测血清中抗体和IL-2.IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ的水平,检测结果显示免疫重组蛋白实验组的抗体和细胞因子与对照组相比均有明显的升高。