论文部分内容阅读
本文分为三个部分，第一部分为赶山鞭（Hypericumattenuatum）的化学成分研究。第二部分为赶山鞭抑制血管生成的有效成分研究。第三部分为赶山鞭有效成分的初步毒理研究。
方法：
①利用现代色谱技术对赶山鞭（Hypericumattenuatum）95％乙醇提取物进行分离，通过物理化学和光谱学方法鉴定结构。②采用MTT实验法检测quercetin,rutin,hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside五种化合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的抑制血管生成活性；化合物浓度梯度为0.1、1、5、10、50、100μg·mL-1;③采用斑马鱼胚胎毒性实验检测quercetin，rutin，hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside，quercertin-3-O-β-D-glucoside五种化合物对斑马鱼胚胎的毒性；化合物浓度梯度为1、2、4、8、16、32μg·μl-1。
结果：
①从赶山鞭（Hypericumattenuatum）95％乙醇提取物中分离得到7个化合物，通过物理化学和光谱学方法鉴定结构分别为：quercetin，rutin，hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside,quercertin-3’-O-β-D-glucoside.quercertin-4’-O-β-D-glucoside.
②HUVEC细胞的MTT检测表明，在0.1、1、5、10、50、100μg·mL-1浓度梯度范围内，quercetin，rutin对HUVEC细胞均有生长抑制效应。quercetin浓度＜1μg·mL-1时不显著，≥1μg·mL-1时极显著(p＜0.01);rutin在此浓度范围内均极显著(p＜0.01)；hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside在浓度＜5μg·mL-1时对HUVEC细胞有生长抑制效应，在浓度≤0.1μg·mL-1时对HUVEC细胞有极显著生长抑制效应(p＜0.01)。在浓度＞5μg·mL-1时对HUVEC细胞有极显著的生长促进效应(p＜0.01)。
quercertin-3-O-β-D-glucoside在浓度＜1μg·mL-1时，对HUVEC细胞有生长抑制效应。在浓度≤0.1μg·mL-1时，对HUVEC细胞有显著生长抑制效应(p＜0.05)，在浓度＞5μg·mL-1时，对HUVEC细胞有生长促进效应。在浓度＞10μg·mL-1，对HUVEC细胞有显著的生长促进效应(p＜0.05)．在浓度＞100μg·mL-1，对HUVEC细胞有极显著的生长促进效应(p＜0.01)．
5种化合物均不呈剂量依赖效应。
③斑马鱼胚胎毒性研究结果表明，72hpf,在1、2、4、8、16、32μg·μl-1浓度梯度范围内，quercetin，rutin，hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside，quercertin-3-O-β-D-glucoside对斑马鱼胚胎致死致畸效应明显，随着浓度递增，死亡率、畸形率均升高，且呈现一定的剂量依赖效应。72hpf,quercetin，rutin,hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside，quercertin-3-O-β-D-glucoside显著抑制孵化，随着浓度递增，抑制愈加明显，呈现一定的剂量依赖效应。
结论：
①对藤黄科(Guttiferae)金丝桃属植物赶山鞭（Hypericumattenuatum）95％乙醇提取物进行分离，得到7个单体化合物，对其进行了结构鉴定。
②quercetin，rutin有一定程度的抑制HUVEC细胞生长的作用；hyperin，quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside,quercertin-3’-O-β-D-glucoside，quercertin-4’-O-,β-D-glucoside有一定程度的抑制HUVEC细胞生长和促进HUVEC细胞生长的作用。
③quercetin,rutin,hyperin,quercertin-3-O-α-L-arabinofuranoside,quercertin-3-O-β-D-glucoside等成分可能有一定毒性。