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研究背景：日本血吸虫病在我国的防治形势仍然严峻,其导致的肝纤维化在有效杀虫治疗之后仍会发展并引起多种严重并发症。迄今为止仍未发现防止或逆转血吸虫病肝纤维化的可靠方法,亟需对血吸虫病肝损伤机制进一步研究以寻找新的治疗靶点。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一个功能复杂的磷酸化糖蛋白,近期研究发现其在脂肪性肝炎、中毒性肝炎等炎症性肝病中起着趋化因子、促炎因子和免疫调节因子等作用。本研究将通过观察OPN在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的动态表达规律,分析其与肝脏病理改变及多种促纤因子的相关性,并比较血吸虫病肝损伤在特异性OPN中和抗体干预后的变化情况,以进一步探讨血吸虫病肝损伤机制,为临床血吸虫病的防治工作提供实验及理论依据。第一章日本血吸虫病肝损伤小鼠模型的构建及评价目的：构建稳定的类似人类日本血吸虫病自然病程的小鼠模型,观察评价血吸虫病肝损伤病理改变的动态进程,为随后探讨OPN在血吸虫病肝损伤中的表达规律和作用机制及药物干预的时机选择和疗效观察提供依据。方法：以滴有含日本血吸虫尾蚴(15±1条/只)的去氯水的玻片覆盖于小鼠腹部20min形成急性感染,感染后每日收集小鼠粪便进行涂片并在显微镜下观察,将首次在粪便中发现血吸虫虫卵的日期视为血吸虫肝病的发病起始,自即日起及之后每隔2周随机处死小鼠直至12周,取小鼠肝脏行HE染色和Masson染色观察并评价肝脏病理改变。结果：感染后第42天首次在小鼠粪便中发现血吸虫虫卵；HE染色显示感染后第6周肝脏出现虫卵沉积和虫卵肉芽肿,第10周急性肉芽肿性炎达高峰,第14周炎症细胞消散,成纤维细胞出现,慢性肉芽肿形成,第18周虫卵肉芽肿开始崩解；Masson染色显示感染后第6周虫卵周围出现胶原纤维,第10周胶原沉积达高峰,出现典型的肝纤维化病理改变,第14周后纤维化程度逐渐减轻而趋于稳定。实验显示日本血吸虫小鼠感染成功率和完成实验的小鼠建模成功率均为100%。结论：日本血吸虫尾蚴腹部敷贴感染法成功构建了稳定的类似人类日本血吸虫病自然病程的小鼠模型；日本血吸虫病肝损伤主要体现在急性肉芽肿性炎症和胶原纤维沉积即肝纤维化两方面。第二章OPN表达与日本血吸虫感染小鼠肝脏病理改变的关系目的：探讨OPN在日本血吸虫感染小鼠肝脏中的表达规律及其与肝脏病理改变的关系。方法：100只BALB/C小鼠随机分为对照组(n=50)和模型组(n=50),模型组以日本血吸虫尾蚴腹部敷贴感染法建模,对照组以不含尾蚴的去氯水代替含尾蚴液处理。分别于造模后第6、8、10、14和18周每组随机处死10只小鼠并取肝脏组织,行HE和Masson染色观察并评价肝脏病理改变,采用免疫组化法、RT-PCR和Western blotting检测OPN蛋白和mRNA表达,采用免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,α-SMA)和转化生长因子-β1(transforming growth factor,TGF-β1)蛋白表达,分析OPN表达与肉芽肿面积、胶原沉积程度、a-SMA和TGF-β1表达的相关性。结果：对照组不同时间点OPN、α-SMA和TGF-β1蛋白表达均无明显变化(P>0.05),且均显著低于同时间点模型组(P<0.01)。模型组OPN、α-SMA和TGF-β1于感染后第6周可见表达,第10周达高峰(P<0.01),随后逐渐下降,OPN表达与肉芽肿面积(r=0.875,P<0.01)、胶原容积百分比(r=0.858,P<0.01)、α-SMA(r=0.720,P<0.01)和TGF-p1(r=0.905,P<0.01)表达均成正相关。结论：OPN表达在日本血吸虫感染小鼠肝脏病理改变过程中起着促进虫卵肉芽肿形成和肝纤维化发展的作用,其具体机制尚需进一步研究。第三章OPN中和抗体联合吡喹酮干预对日本血吸虫感染小鼠肝损伤的作用目的：评价OPN中和抗体联合吡喹酮对日本血吸虫感染小鼠肝损伤的治疗效果。方法：100只BALB/C小鼠随机分为对照组(A组,n=20)、模型组(B组,n=20)、吡喹酮干预组(C组,n=20)、吡喹酮+秋水仙碱干预组(D组,n=20)和吡喹酮+OPN中和抗体干预组(E组,n=50)。除了A组,其余四组小鼠均通过日本血吸虫尾蚴腹部敷贴感染构建日本血吸虫肝损伤模型。分别对C组、D组和E组小鼠予以吡喹酮、吡喹酮+秋水仙碱和吡喹酮+OPN中和抗体处理。分别于感染后第9周和第15周每组随机处死10只小鼠并取肝脏组织,行HE和Masson染色观察并评价肝脏病理改变,并采用免疫组化、RT-PCR和western blotting检测OPN、TGF-p1和α-SMA表达。结果：吡喹酮+OPN中和抗体干预组与吡喹酮干预组和吡喹酮+秋水仙碱干预组相比较,血吸虫病肝损伤急性期及慢性期的肉芽肿面积、胶原纤维沉积、OPN、TGF-p1及α-SMA表达均显著降低(P<0.05)。结论：OPN中和抗体联合吡喹酮驱虫能减轻日本血吸虫肝病进程中的肉芽肿反应和肝纤维化程度。