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研究背景和目的:甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,其发病率在头颈部恶性肿瘤中居首位。在过去的几十年间,其发病率一直呈稳步上升趋势。甲状腺癌以甲状腺乳头状癌为主,大部分甲状腺乳头状癌患者预后良好,但是仍有部分患者发生术后复发、对I131治疗不敏感、远处转移等情况;甲状腺未分化癌尽管发病率很低,但是病死率极高,患者五年生存率不到10%。因此寻找新的治疗靶点非常必要。长链非编码RNA（Long-chain non-coding RNA,lnc RNA）是一类核苷酸数量超过200bp,且不能进行蛋白质编码的RNA。近年来,很多研究认为其具有类似癌基因或抑癌基因的作用。lncRNA LINC00982被发现在多种恶性肿瘤中呈现低表达,且有研究指出其可以影响肿瘤细胞增殖及侵袭能力。全基因组学研究表明LINC00982在甲状腺癌中的表达降低,但是其在甲状腺癌发生发展中的作用机制不明。本研究旨在揭示甲状腺癌组织中LINC00982的表达及其与临床病理之间的关系,探讨其在甲状腺癌增殖和侵袭中的作用,并阐明其作用机制。方法:1、根据纳入和排除标准,将148例甲状腺乳头状癌患者纳入本研究,收集患者的临床及病理资料,并采集148例患者的癌组织及癌旁组织。采用qRT-PCR实验方法分别检测癌组织及癌旁组织中LINC00982的表达,并使用配对T检验法统计其表达是否存在统计学差异;T检验方法分别检验不同年龄、性别及临床病理特征分组的患者癌组织中LINC00982的表达是否存在差异,分析LINC00982的表达与患者年龄、性别、临床分期及病理的关系。2、选取两种甲状腺癌细胞系BHT101和B-CPAP,进行细胞转染实验,根据转染片段的不同分为空白对照组、LINC00982组（pcDNA4.0-LINC00982转染）、pcDNA4.0组（pcDNA4.0转染）、siLINC00982组（siLINC00982转染）和siCTRL组（siCTRL转染）。通过CCK8实验、EDU实验和克隆形成实验,检测各组甲状腺癌细胞增殖情况;通过流式细胞仪检测甲状腺癌细胞周期及细胞凋亡;通过Transwell实验检测甲状腺癌细胞的迁移情况。3、将稳定转染的各组BHT101细胞系经左侧腋窝皮下注射入裸鼠体内,构建甲状腺癌裸鼠皮下荷瘤模型,根据注射转染细胞的不同分为空白对照组、LINC00982组、pcDNA4.0组、siLINC00982组和siCTRL组。分别在接种癌细胞后3天、7天、14天、21天和28天测量肿瘤的体积,并记录好实验数据。在接种肿瘤细胞28天后,采用20%CO2处置10分钟处死裸鼠,将皮下肿瘤切下并按要求保存好标本,然后用qRT-PCR法检测裸鼠肿瘤内LINC00982的表达,免疫组化法检测裸鼠肿瘤组织中Ki67的表达情况。4、分别在稳定转染的各组甲状腺癌细胞中和裸鼠肿瘤中提取蛋白质,western blot法检测PI3K和AKT的表达和活化水平,以及通路下游蛋白Bcl-2、Cyclin D1、Bax和P21的表达情况。5、在稳定转染了LINC00982片段的BHT101和B-CPAP细胞系的培养基中,加入IGF-1进行干预,根据转染和干预情况,将细胞分为对照组、LINC00982组和LINC00982+IGF-1组。western blot法检测各组细胞中PI3K和AKT的表达和活化水平,以及通路下游蛋白Bcl-2、Cyclin D1、Bax和P21的表达情况。通过CCK8实验、EDU实验和克隆形成实验,检测甲状腺癌细胞增殖能力变化;通过流式细胞仪检测甲状腺癌细胞周期及细胞凋亡情况;通过Transwell实验检测甲状腺癌细胞的迁移。结果:1、甲状腺乳头状癌组织样本中LINC00982的表达水平（0.87±0.58）显著低于癌旁组织（1.5±1.0）,差异具有统计学意义（P<0.01）。LINC00982在不同的性别、年龄组及肿瘤的多发情况分组中表达无显著差异（P>0.05）。而在淋巴结转移情况、肿瘤大小、临床分期的分组中,LINC00982的表达均存在显著差异（P<0.05）。2、CCK8实验、EdU实验和克隆形成实验结果表明,LINC00982组BHT101和B-CPAP细胞系增殖能力降低,siLINC00982组细胞增殖能力增强;流式细胞仪实验结果显示,LINC00982组BHT101和B-CPAP细胞系处于G0/G1期的细胞著增加,S期细胞减少,细胞凋亡率提高,siLINC00982组处于G0/G1期的细胞著减少,S期细胞增多,细胞凋亡率降低;Transwell实验结果显示,LINC00982组BHT101和B-CPAP细胞系发生迁移的细胞数量减少,siLINC00982组发生迁移的细胞数量增加。3、裸鼠荷瘤实验发现,接种BHT101细胞28天后,LINC00982组裸鼠肿瘤中LINC00982的表达显著升高,肿瘤体积较正常组显著减小,且肿瘤中Ki67阳性率较低;siLINC00982组裸鼠肿瘤中LINC00982的表达降低,肿瘤体积明显增大,且肿瘤中Ki67阳性率较高。4、western blot实验显示,BHT101和B-CPAP细胞系中,LINC00982组细胞PI3K表达降低,AKT活化减少,Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达降低,Bax和P21蛋白表达升高;siLINC00982组细胞PI3K表达升高,AKT活化增加,Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达升高,而Bax和P21蛋白表达降低。5、裸鼠种植肿瘤提取蛋白western blot实验显示,LINC00982组肿瘤中PI3K表达降低,AKT活化减少,Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达降低,Bax和P21蛋白表达升高;siLINC00982组肿瘤中PI3K表达升高,AKT活化增加,Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达升高,而Bax和P21蛋白表达降低。6、western blot实验显示,在BHT101和B-CPAP细胞系中,IGF-1干预后,LINC00982+IGF-1组细胞PI3K表达和AKT活化水平均得到了恢复,Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达升高,而Bax和P21蛋白表达降低。7、在BHT101和B-CPAP细胞系中,IGF-1干预后,CCK8实验、EDU染色实验和克隆形成实验结果表明,LINC00982+IGF-1组细胞增殖能力恢复;流式细胞仪实验结果显示,LINC00982+IGF-1组处于G0/G1期的细胞减少,S期细胞增多,细胞凋亡率降低;Transwell实验结果显示,LINC00982+IGF-1组细胞发生迁移的细胞数量增加。结论:长链非编码RNA LINC00982在甲状腺乳头状癌组织中呈现低表达,且在肿瘤更大、临床分期较晚、有淋巴结转移的患者中,其表达相对较低。在体外过表达LINC00982可以抑制甲状腺癌细胞增殖,改变细胞周期、诱导细胞凋亡并降低细胞的迁移能力,在体内过表达LINC00982可以抑制肿瘤生长。经过我们实验发现LINC00982可以通过降低PI3K的表达,抑制AKT的活化,从而降低PI3K/Akt信号通路下游靶蛋白的表达,抑制了PI3K/Akt信号通路的活性。