美洲商陆抗病毒蛋白(PAP)属于核糖体失活蛋白(RIPs)，能有效抑制植物病毒的侵染，本研究针对缺失型PAP基因在巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统中表达量较低的问题，有目的的利用毕赤酵母偏好的密码子对缺失型PAP基因密码子进行了优化，调整或去除影响mRNA稳定的碱基序列，以期获得适于在毕赤酵母中高效表达的缺失型PAP基因，其主要研究结果如下： 1．完成了对缺失型PAP基因密码子的优化。以获得缺失型PAP表达量较高的转基因巴斯德毕赤酵菌为目的，在不改变野生型基因氨基酸序列的前提下，根据毕赤酵母密码子的偏好及密码子简并原则，对缺失型PAP基因(GeneBank：AF338910，编码237个氨基酸)进行下列优化改造：使用毕赤酵母菌偏好密码子，使PAP基因的密码子符合毕赤酵母表达外源蛋白时对密码子的偏好，提高序列的G+C含量；在改造后的PAP基因3’末端添加终止子，在改造后的序列两端分别添加Not Ⅰ及Snab Ⅰ限制性内切酶酶切位点，改造后的基因命名为PAPs。 2．人工合成了PAPs基因序列，构建了其克隆载体T-easy-PAPs。在上述密码子优化结果的基础上确定了人工合成全基因的引物序列，通过5轮连续延伸PCR反应及一次定点突变得到了改造后的PAPs全序列，合成的新基因克隆到通用载体T-easy上。改造后的基因中有74.1％的密码子为毕赤酵母偏好的密码子，序列的G+C含量由38.7％提升为45.1％。 3．构建了PAPs基因的分泌型酵母表达载体pPIC9k-PAPs。pPIC9k系列载体具有α-因子信号序列、含5个酶切位点的多克隆位点以及His4与Kan双筛选标记。表达载体在转化酵母菌宿主时，可整合到酵母菌的基因组染色体上，得到带有选择标记的重组子。 4．获得了转PAPs基因的重组酵母菌株。将表达载体pPIC9k-PAPs与空载体pPIC9k经限制性内切酶Sal Ⅰ线性化后，电激转化到巴斯德毕赤酵母GS115菌株细胞中，通过PCR筛选出Mut~+与Mut~S重组子。 5．验证了Mut~+重组子表达产物的抗病毒活性。Western-blot结果表明：在甲醇诱导条件下表达的外源蛋白与PAP抗血清有明显的杂交信号。抗病毒活性测定结果也表明，表达的蛋白具有抑制病毒侵染的活性。 6．明确了摇瓶培养条件下诱导时间、甲醇浓度、培养基pH值等诱导条件对Mut~+重组菌株表达PAPs基因的影响。结果表明：Mut~+重组菌株在甲醇诱导第五天表达量达到最高水平，延长诱导时间会导致表达量下降；在1％的甲醇浓度诱导下，PAP能得到最佳的表达效率；培养基pH值在偏酸性条件下(5.6～6.4)蛋白的表达量都维持在较高