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猪细小病毒病和伪狂犬病都是引起母猪繁殖障碍的主要疾病。猪细小病毒病是由猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)引起的,猪伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的。这两种疾病在世界范围内广泛分布,给养猪业造成巨大的经济损失。为了有效预防这两种疾病,本试验建立了检测PPV和PRV的TaqMan荧光定量PCR方法以及检测PPV抗体的ELISA方法,并利用猪细小病毒BQ-C株和猪伪狂犬病毒ΔgE株,试制了PPV-PRV二联灭活疫苗,对试制的疫苗免疫效力进行了初步试验。本研究针对PPV VP2基因和PRV gB基因序列,建立了检测PPV和PRV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明所建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法敏感性较高,特异性较好,批间、批内变异系数均小于3%,其中针对PPV VP2基因的荧光定量PCR方法可检测到13拷贝的初始模板,针对PRV gB基因的荧光定量PCR方法可检测到167拷贝的初始模板,敏感性是常规PCR方法的100倍。本研究利用杆状病毒载体表达系统表达VP2蛋白(rVP2)作为抗原,建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法。经条件优化其最佳抗原包被浓度为10μg/mL,最佳酶标二抗稀释倍数为10000倍,最佳包被液为0.01mol/L碳酸盐缓冲液(PH=9.6),最佳封闭液为5%的脱脂乳-PBS,最佳封闭时间为90 min,最佳血清稀释倍数为200倍,其阳性Cut-off值为0.3。用该方法与商品化ELISA试剂盒分别检测360份临床血清样品,结果表明建立的ELISA方法检测PPV抗体阳性率为75.00%,商业化ELISA试剂盒检测PPV抗体阳性率为75.83%,二者符合率为94.17%。本研究利用本实验室保存的PPV-BQ-C毒株和rPRV-ΔgE毒株制备病毒液作为该二联疫苗的抗原,利用β-丙内酯将病毒液灭活,将上述灭活的两种病毒液以PPV-BQ-C︰rPRV-ΔgE=2︰1的比例混合均匀,以抗原︰佐剂=8.5︰1.5的比例乳化制成疫苗。对疫苗进行初步检验后免疫后备母猪,二联疫苗于免疫后四周PPV HI抗体水平达到高峰,PPV-PRV二联灭活疫苗组HI抗体水平为1﹕776,PPV商业灭活疫苗组HI抗体水平为1︰445,免疫后PPV-PRV二联灭活疫苗组PRV中和抗体水平最高为1︰59.46,PRV商业苗组PRV中和抗体水平最高为1︰32.70。为了研究PPV-PRV二联灭活疫苗的免疫保护效力,对免疫后的后备母猪分别用PPV和PRV强毒攻击,通过检测母猪各组织中的病毒载量来评价疫苗的保护作用。结果显示攻毒后4周,攻PPV强毒后PPV-PRV二联苗组各组织中均检测不到病毒;攻PRV强毒的各组中,PPV-PRV二联苗组在肝脏中能检测到病毒,表明该二联灭活疫苗可抵抗PPV强毒攻击,但不能完全抵抗PRV强毒攻击。