PV-杀白细胞素(PVL)S组分对人急性髓系白血病THP-1细胞株的作用及机制研究

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目的:PV-杀白细胞素(Panton-Valentine Leukocidin,PVL)是由金黄色葡萄球菌产生的细胞外毒素。PVL有LukS-PV和LukF-PV两个成分组成。在先前的研究中,我们报道了PVL及其组分能够诱导人多形核粒细胞凋亡。本课题的目的:(1)检测rLukS对人髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响;(2)探讨rLukS对THP-1细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用机制。方法:体外培养THP-1细胞,用不同浓度rLukS (0,0.05,0.25,0.5,0.75和1μM/L)作用THP-1细胞3,6,9和12h,采用MTS法检测细胞增殖抑制率;分别用不同浓度rLukS(0,0.05,0.5和1μM/L)作用于THP-1细胞12h后,用TUNEL法检测细胞凋亡坏死;利用流式细胞仪通过Annexin V FITC/PI染色法检测细胞凋亡,PI染色法检测细胞周期;用Westernblot方法检测细胞周期蛋白;用凋亡PCR芯片(Catalog No. PAHS-012A),检测经1μM/L rLukS处理前后凋亡相关基因表达的差异,然后采用Westernblot方法验证芯片结果。结果:rLukS抑制THP-1细胞的增殖,且抑制作用呈时间浓度依赖关系;rLukS将THP-1细胞阻滞在G0/G1期并且下调细胞周期蛋白cyclinD1;rLukS诱导细胞的凋亡率和浓度成正比;芯片结果显示经1μM/L rLukS处理的THP-1细胞前后基因表达差异主要涉及的是Bcl-2家族、caspase家族、TNF配基及其受体等家族基因,Westernblot结果显示: rLukS下调Bcl-2;上调caspase-8, caspase-3, caspase-9和Bax。结论:(1)rLukS能够抑制THP-1细胞增值和诱导其凋亡。(2)rLukS通过下调Bcl-2,上调caspase-8, caspase-3, caspase-9和Bax的线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。
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