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目的:研究盐霉素对结直肠癌(CRC)中癌症干细胞(CSCs)的影响并初步探讨其作用机制。
方法:(1)体外盐霉素与奥沙利铂处理人类CRC细胞系H129和SW480,不同药物处理后,细胞计数试剂盒8(CCK8)确定CRC细胞的存活性,并针对不同的药物对细胞的作用绘制剂量反应曲线;
(2)盐霉素与奥沙利铂处理CRC细胞后,流式细胞术定量性分析CD133+细胞亚群比例,并进一步用软琼脂检测功能性分析CRC细胞的克隆球形成能力;
(3)盐霉素与奥沙利铂处理CRC细胞后,transwell检测分析CRC细胞的迁移及侵袭能力;
(4)盐霉素与奥沙利铂处理CRC细胞后,采用Westernblot分析,免疫荧光染色,及real-time PCR分析,分别定性、定位、定量性检测CRC细胞中上皮间充质性转换(EMT)的上皮性标志物E-cadherin和间充质性标志物Vimentin的表达情况。
结果:(1)相对于奥沙利铂,盐霉素对人类CRC细胞H129和SW480显示出更强的细胞毒性作用(IC50处比较,P<0.05);
(2)与奥沙利铂相反,盐霉素显著性的降低了CD133+细胞亚群的比例(P<0.05);并降低了CRC细胞的克隆球形成能力(P<0.05);
(3)与奥沙利铂相反,盐霉素显著性的降低了CRC细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05);
(4)与奥沙利铂不同,盐霉素显著性的上调了MET的上皮性标志物E-cadherin的表达并下调了间充质性标志物Vimentin的表达。
结论:盐霉素可以选择性靶向CRC中CSCs亚群,并降低其迁移和侵袭能力。其可能的机制是通过抑制上皮间充质转换(EMT),从而实现MET来完成的。