【摘 要】
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[目的] 研究重组杆状病毒作为内耳基因转染载体的可行性及其转染特点。 [方法] 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒Bac-GFP,以不同MOI的病毒和不同浓度的丁酸
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[目的] 研究重组杆状病毒作为内耳基因转染载体的可行性及其转染特点。
[方法] 应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒Bac-GFP,以不同MOI的病毒和不同浓度的丁酸钠转染螺旋神经节细胞,通过荧光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞转染率和绿色荧光蛋白表达强度,并检测杆状病毒和丁酸钠对螺旋神经节细胞的毒性。建立新生大鼠耳蜗Corti 器体外模型,加入携带报告基因的病毒悬液,观察外源基因表达情况。
[结果] 杆状病毒可以高效转染螺旋神经节细胞,转染效率可以高达77.69%。Bac-GFP转染率和表达强度随着MOI和丁酸钠浓度的提高而提高。GFP6小时开始表达,在第2天表达量最高。重组杆状病毒在MOI值为800和丁酸钠终浓度小于或等于10 mM时,对螺旋神经节细胞没有明显细胞毒性。耳蜗Corti 器体外培养48小时后,培养组织生长良好。Bac-GFP联合丁酸钠可以高效转染毛细胞和螺旋神经节细胞, 同时并没有改变Corti器的正常结构。
[结论] 杆状病毒可以在体外高效,安全,快速的转染毛细胞和螺旋神经节细胞,有希望成为内耳基因治疗的新型载体。
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