负压空化辅助双水相提取富集木豆叶中四种主要成分工艺研究

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木豆是常见的主要食用豆类作物之一,其主要成分有黄酮类和芪类化合物,据报道这些化合物的药理作用很广泛,包括抗炎、抗病毒、抗氧化、保护神经细胞等。本研究建立了HPLC对木豆叶中主要活性成分木豆芪酸、木豆素C、球松素及球松素查尔酮的定量分析方法;分别优化了负压空化和负压空化辅助双水相法(NPC-ATPE)提取工艺参数,最终建立了NPC-ATPE提取富集木豆叶中的木豆芪酸、木豆素C、球松素及球松素查尔酮优化生产工艺,主要研究结果如下:1.木豆芪酸、木豆素C、球松素以及球松素查尔酮分析方法的建立色谱柱:HIQ sil C18W (5μm,250mm×4.6mm i.d.),流动相组成确定为0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B),梯度洗脱条件:0-15min,77-80%(B);15-20min,80-90%(B);20-22min,90-100%(B)。流速:1.0mL/min,检测波长:287.6nm,341.1nm,298.3nm及258.0nm,进样量:5μL,柱温:30℃。保留时间分别为6.908,8.039,14.523,19.720min。在此检测条件下所建立的方法,目标化合物线性关系良好,标准曲线R2均大于或等于0.9988。HPLC分析方法的精密度和重复性R.S.D.均小于5%,稳定性R.S.D.小于5%,加样回收率在97.36%-101.82%之间,R.S.D.小于4%。2.确定了负压空化提取木豆叶中目标成分的最佳工艺参数:提取固液比:1:50(g/g)提取时间:3min提取负压:-0.07MPa提取温度:30℃乙醇浓度:80%(v/v)在上述优化的条件下,木豆芪酸、木豆素C、球松素以及球松素查尔酮的提取率分别为9.35mg/g,4.56mg/g,4.01mg/g和0.452mg/g。目标成分的纯度分别为2.254%,0.943%,0.906%以及0.426%。3.在上述优化的负压空化工艺参数下,建立并优化双水相体系,具体参数:乙醇质量分数:23%硫酸铵质量分数:21%温度:35℃负压空化辅助双水相提取富集木豆叶中木豆芪酸、木豆素C、球松素及球松素查尔酮的平均提取率分别为10.175、5.162、4.925、0.523mg/g(n=3)。目标成分的纯度分别达到4.557%,2.204%,2.072%以及0.873%,与以乙醇为提取溶剂的负压空化提取方法比较,四种化合物的纯度均提高了2倍以上。4.不同提取方法粗提物抗氧化活性的对比:本研究采用DPPH、ABTS和FRAP分别对不同提取方法粗提物进行抗氧化活性实验,结果如下:NPC-ATPE粗提物的IC50和TEAC值分别为0.337mg/mL,0.1511mmol/g、0.2661mmol/g。结果表明,该方法能够有效的增强木豆叶粗提物的抗氧化活性。本研究结果表明,与传统提取方法相比,这种提取新工艺不仅能够有效的提高目标成分的产量和纯度,而且大大增强了粗提物的抗氧化活性。这说明负压空化辅助双水相(NPC-ATPE)提取法适用于木豆叶中黄酮类和芪类化合物的提取,能有效利用木豆叶,为木豆叶工业化规模提取的应用提供了有价值的数据,在中药材活性成分的提取中具有广阔的应用前景。
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