【摘 要】
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本文首次在国内建立了一套大规模接合法酵母双杂交的标准化流程,从而搭建了一个在酵母中高通量筛选相互作用蛋白质的技术平台。在此基础上,我们对1000多个人类肝脏基因编码蛋
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本文首次在国内建立了一套大规模接合法酵母双杂交的标准化流程,从而搭建了一个在酵母中高通量筛选相互作用蛋白质的技术平台。在此基础上,我们对1000多个人类肝脏基因编码蛋白的相互作用进行了筛选,并首次发现了163对新的相互作用蛋白。这些结果为人肝蛋白质相互作用连锁图的研究奠定了有利的基础。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径是真核生物细胞重要的信号转导通路。丝氨酸/苏氨酸激酶ZAK位于MAPK信号通路的上游,关系到许多未被揭示的功能机制。本文以人源β型ZAK基因为诱饵,用大规模接合法酵母双杂交技术在人类肝脏cDNA文库中首次筛选到了它的一个相互作用蛋白,14-3-3ζ的编码基因克隆YWHAZ,并在体外和体内验证了这两个蛋白的相互作用。又通过磷酸化抗体的免疫杂交实验,首次证实了该相互作用的实质为磷酸化过程。在此基础上,对其生物学意义进行了初步探索,发现该对蛋白的相互作用能够影响细胞周期,提高G2期细胞的比例,为进一步的相关研究提供了线索。
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