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目的:近年来,由于免疫系统异常引起的复发性流产（Recurrent spontaneous abortion,RSA）的患者数量持续增加。辅助性T细胞（Helper T cell,Th cell）是免疫系统的重要组成部分。根据分泌的细胞因子不同,Th细胞可分为辅助性1型T细胞（Helper T1 cell,Th1 cell）、辅助性2型T细胞（Helper T2 cell,Th2 cell）、辅助性3型T细胞（Helper T3 cell,Th3 cell）、辅助性9型T细胞（Helper T9 cell,Th9 cell）和辅助性17型T细胞（Helper T17 cell,Th17 cell）等多种亚型。Thl细胞主要分泌致炎因子IL-2、IL-21、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-10等细胞因子。Th2细胞主要分泌抗炎因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-13等细胞因子。Th1细胞所介导的细胞免疫反应可以产生排斥胚胎效应,Th1细胞因子的含量增加对同种免疫因素介导的复发性流产有不利影响。Th2细胞主要分泌抗炎因子,可维持母胎界面的免疫耐受,维持妊娠的顺利进行。母体与胚胎间的Th1/Th2平衡状态是保证妊娠得以正常进行的重要条件,若Th1/Th2平衡状态被破坏,可能导致胎盘损伤、流产发生。目前临床上发现,大约有60%的复发性流产与Th1细胞因子和Th2细胞因子水平及Th1/Th2平衡状态（Th1/Th2 balance state ratio）有关。目前,国内尚无与复发性流产相关的Th1细胞、Th2细胞及Th1/Th2平衡状态比值的正常参考区间和临床分度临界值,临床医生仅能凭借临床经验和风湿免疫科得出的与风湿免疫疾病相关的Th1细胞、Th2细胞及Th1/Th2平衡状态比值的参考区间对这类患者进行口服醋酸泼尼松治疗。基于此,本研究拟以北京大学人民医院风湿免疫科研究出的与风湿免疫疾病相关的Th1细胞、Th2细胞和Th1/Th2平衡状态比值的正常参考区间（其Th1细胞的参考区间为5.53%-19.82%,Th2细胞的参考区间为1.25%-2.88%,Th1/Th2平衡状态比值的参考区间为4.16%-13.47%）为参照标准,通过流式细胞术测定有复发性流产史的女性患者和无复发性流产史的正常育龄期女性外周血中Th细胞、Th1和Th2细胞的水平,计算出Th1细胞、Th2细胞水平及Th1/Th2平衡状态比值,比较有复发性流产史患者与无复发性流产史患者外周血中Th1细胞、Th2细胞水平和Th1/Th2平衡状态比值的情况;以及分析Th1细胞和Th2细胞水平及Th1/Th2平衡状态比值是否对复发性流产的诊断和治疗有潜在价值。方法:1.研究对象:实验组为2016年10月至2018年10月就诊于中国人民解放军总医院第六医学中心辅助生殖中心门诊的477例有复发性流产史的处于备孕期间的女性患者。对照组为2016年10月至2018年10月就诊于中国人民解放军总医院第六医学中心辅助生殖中心门诊的60例无复发性流产病史的处于备孕期间的正常育龄期女性。2.纳入标准:通过采集病史对患者做出初步诊断,根据初步诊断嘱患者做辅助检查,具体的辅助检查包括夫妻双方染色体检查、妇科检查和阴道B超检查、血常规检查、性激素七项检查、排卵后第三天和排卵后第五天性激素三项检查、甲状腺功能检查、乙型肝炎,梅毒和丙型肝炎检查、血小板凝集试验、D-Diner检查、抗β2抗体检查,自然杀伤细胞检查、抗心磷脂抗体（Anticardiolipin antibody,ACA）检查、抗核抗体（Antinuclear antibody,ANA）检查、辅助检查结果均正常者确定为入组人群。纳入标准:夫妻双方染色体正常;女性生殖道结构正常;无月经紊乱、早发性卵巢功能不全（Premature ovarian insufficient,POI）、卵巢早衰（Premature ovarian failure,POF）、黄体功能不全;无乙型肝炎、丙型肝炎、梅毒等感染性疾病;无凝血功能障碍性疾病、抗心磷脂综合征、过敏性疾病;近三个月没有接受过免疫抑制剂治疗的患者。3.参照标准:北京大学人民医院风湿免疫科研究出的与风湿免疫疾病相关的Th1细胞、Th2细胞和Th1/Th2平衡状态比值的参考区间,其Th1细胞的参考区间为5.53%-19.82%,Th2细胞的参考区间为1.25%-2.88%,Th1/Th2平衡状态比值的参考区间为4.16%-13.475%。4.本次研究已取得患者本人及其家属的知情同意。5.实验检测指标:采集实验组和对照组患者的外周血,经过外周血孵育,流式样本制备和流式细胞仪检测及分析等步骤,得出Th细胞、Th1细胞及Th2细胞水平。其中Th细胞的检测标记物为CD3 PerCP和CD8APC,以CD3+和CD8-所在区域来表示Th细胞群。Th1细胞的检测标记物为CD3 PerCP和IFN-γFITC,以CD3+和IFN-γ+所在区域来表示Th1细胞群。Th2细胞的检测标记物为CD3 PerCP和IL-4 PE,以CD3+和IL-4+所在区域来表示Th2细胞群,所得结果均用百分数表示。Th1/Th2平衡状态比值是通过Th1细胞/Th2细胞计算得出的。6.统计学方法:利用SPSS21.0进行数据统计分析。所有数据均先采用k-s检验分析是否符合正态分布。患者一般资料符合正态分布,结果用平均数±标准差表示;实验组和对照组外周血中Th1细胞、Th2细胞和Th1/Th2平衡状态比值数据不符合正态分布,结果用中位数（median）和四分位数间距（interquartile range,IQR（25-75））表示。利用SPSS21.0计算平均数、标准差、中位数和IQR值。用流式细胞检测图和散点图分析Th1细胞和Th2细胞水平及Th1/Th2平衡状态比值的分布情况。非正态数据采用秩和检验分析实验组和对照组外周血中Th1细胞、Th2细胞和Th1/Th2平衡状态比值的比较:P<0.05说明差异有统计学差异。用ROC曲线下面积（Area under the curve,AUC）和约登指数（Youden Index,YI）评价Th1细胞、Th2细胞和Th1/Th2平衡状态比值对复发性流产的诊断价值:当ROC曲线下面积接近0.5时,表示没有诊断价值;ROC曲线下面积小于0.7,表示诊断准确度较低;ROC曲线下面积在0.7-0.9之间表示诊断准确度为中等;ROC曲线下面积在0.9以上表示诊断准确度较高。约登指数取值界于0-1之间,其值越大表示诊断真实性越好。结果:1.不同研究对象外周血中Th细胞、Th1细胞和Th2细胞的水平。健康对照组:60例健康对照组女性其中的一位的流式细胞检测结果图,其外周血中Th细胞（CD3+、CD8-）的水平为32.4%,Th1细胞（CD3+、IFN-γ+）的水平为15.0%,Th2细胞（CD3+、IL-4+）的水平为1.51%。复发性流产组:477例有复发性流产组女性患者其中一位的流式细胞检测结果图,其外周血中Th细胞（CD3+、CD8-）的水平为41.7%,Th1细胞（CD3+、IFN-γ+）水平为12.7%,Th2细胞（CD3+、IL-4+）的水平为0.66%。2.不同研究对象外周血中Th1细胞和Th2细胞水平及Th1/Th2平衡状态比值的分布。此结果是将60例健康对照组女性和477例有复发性流产史的女性患者流式细胞检测结果中的各项数据进行汇总和统计分析后得出的:健康对照组:外周血中Th1细胞水平的中位数（IQR25-75）为11.37%（IQR9.04%-14.84%）复发性流产组:外周血中Th1细胞水平的中位数（IQR25-75）为10.24%（IQR7.90%-13.65%）,有复发性流产史的患者外周血中Th1细胞水平低于健康对照组（P<0.05）。健康对照组:外周血中Th2细胞水平的中位数（IQR25-75）为1.62%（IQR1.50%-1.88%）。复发性流产组:外周血中Th2细胞水平的中位数（IQR25-75）为1.76%（IQR1.46%-2.11%）,有复发性流产史的患者外周血中Th1细胞与健康对照组无差异（P>0.05）。健康对照组:外周血中Th1/Th2平衡状态比值的中位数（IQR25-75）为6.97%（IQR5.36%-8.52%）。复发性流产组:外周血中Th1/Th2平衡状态比值的中位数（IQR25-75）为5.97%（IQR4.69%-7.41%）,有复发性流产史患者外周血中Th1/Th2平衡状态比值低于健康对照组（P<0.05）。3.外周血中Th1细胞和Th2细胞水平及Th1/Th2平衡状态比值对复发性流产诊断的价值。建立Th1细胞和Th2细胞水平及Th1/Th2平衡状态比值的ROC曲线,ROC曲线下面积代表了复发性流产与正常对照之间的差异。以Th1细胞水平进行ROC评价,AUC为0.42（95%CI:0.35-0.49）,当Th1细胞水平为17.39%时,约登指数为0.015。以Th2细胞水平进行ROC评价,AUC为0.57,（95%CI:0.51-0.63）。当Th2细胞水平为2.05%时,约登指数为0.204。以Th1/Th2平衡状态比值进行ROC评价,AUC为0.37（95%CI:0.30-0.44）。当Th1/Th2平衡状态比值为16.92%时,约登指数为0.002。结论:有复发性流产史的患者外周血中Th1细胞水平低于正常育龄期女性。有复发性流产史的患者外周血中Th2细胞水平与正常育龄期女性无差异。有复发性流产史的患者外周血中Th1/Th2平衡状态比值低于正常育龄期女性。