论文部分内容阅读
[目的]探讨槲皮素(Que)对高糖培养SD大鼠海马神经元凋亡以及GRP78、Caspase-12表达的影响。[方法]取新生24h SD大鼠的海马并用消化法分离出海马神经元,密度梯度离心及差速贴壁法纯化,采用NSE蛋白免疫荧光鉴定。神经元培养至第3天,在DMEM完全培养基中加入50mmol/L葡萄糖(Glu),并分别加入0.5、1.25、2.5、5、7.5、10、20、100umol/L Que,干预72h,采用MTT比色法探索Que对高糖条件下海马神经元的适宜作用浓度后,进行实验分组,在高糖培养基中分别加入2.5、5、7.5umol/L Que及10μmol/L Z-VAD-FMK (ZVAD),干预72h,采用MTT比色法观察各组神经元的活性变化,流式细胞仪检测神经元凋亡,Western Blotting检测GRP78、Caspase-12蛋白的表达。[结果]1.经鉴定海马神经元纯度达95%以上。2.MTT比色法实验结果：干预72h时高糖组及不同浓度的Que各组OD值均呈下降趋势,且与正常对照组比较均明显降低(P<0.01)；其中Q5(5umol/L)和Q7.5(7.5umol/L)组OD值显著高于高糖组(P<0.05),与ZVAD组OD值比较无显著性差异(P>0.05)。3.流式细胞仪检测结果：与正常对照组相比,高糖组、Que三组及ZVAD组的神经元凋亡率明显增加(P<0.01)；与高糖组相比,ZVAD组和Que各组神经元凋亡率均明显下降(P<0.01,P<0.05)；其中Q5、Q7.5组与ZVAD组的神经元凋亡率经比较无显著性差异(P>0.05)。4. Western Blotting检测结果：与正常对照组比较,高糖组、ZVAD组及Que各组GRP78和Caspase-12表达均明显增加(P<0.01)；与高糖组比较,Que各组的GRP78和Caspase-12的表达显著下降(P<0.01),其中Q5和Q7.5两组下降尤为显著,且两组间比较无统计学差异(P>0.05)；Q5、Q7.5组和ZVAD组抑制Caspase-12表达的作用比较无统计学差异(P>0.05)。[结论]1.50mmol/L高糖培养海马神经元72h,可抑制海马神经元的活性,促进海马神经元的凋亡,同时使GRP78、Caspase-12的表达增强。2.槲皮素提高高糖培养海马神经元活性,抑制海马神经元凋亡,其作用与Z-VAD-FMK相似。在槲皮素抑制海马神经元凋亡的情况下,GRP78、Caspase-12表达均下降,提示槲皮素的上述作用机制可能与内质网应激有关。[创新点]从细胞和分子水平,观察高糖培养海马神经元凋亡及内质网应激相关蛋白GRP78和caspase-12表达的变化,探索槲皮素对高糖培养海马神经元凋亡、GRP78和Caspase-12表达的影响。经国内外文献检索,未见高糖对体外培养海马神经元GRP78、Caspase-12表达影响的报道,也未见有中药有效成分对体外高糖培养海马神经元凋亡及Caspase-12表达影响的报道。